噬斑測定法于1952年開發，是第一個用于定量病毒濃度的方法。該方法由Renato Dulbecco改進，允許手動確定含有具有復制能力的溶菌性病毒顆粒的樣本中的噬斑形成單位（PFU）數量。

噬斑測定需要使用對目標病毒易感的培養細胞。細胞首先被接種到一個可以附著和生長的表面上，然后過夜培養以形成完整的單層細胞。隨后，將病毒樣本進行多次稀釋，并將每個稀釋度的樣本加入到細胞的培養皿或孔中。經過一段孵育期，病毒附著到目標細胞上后，移除接種液。然后，培養物被覆蓋一層含有營養物質的培養基，以及一種能夠形成凝膠或半固體覆蓋層的物質，如瓊脂糖或甲基纖維素。進入細胞并復制的感染性病毒顆粒可以觸發子代病毒顆粒的釋放。凝膠限制了顆粒的運動，使得新產生的病毒只能感染鄰近的細胞。當病毒殺死感染的細胞時，死亡（或垂死）的細胞會脫落，從而在細胞單層中形成一個孔洞。這個細胞缺失的區域稱為噬斑，表現為生長表面上的圓形斑點。

Cell Biolabs的病毒噬斑測定試劑盒提供了一個準確的系統，用于測定溶菌性病毒的感染性滴度。試劑盒提供的試劑足以在12孔板中進行最多120次滴定實驗。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強烈推薦Cell Biolabs熱銷產品病毒斑檢測試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

病毒斑檢測試劑盒檢測原理：

第一天：在12孔或6孔板中接種細胞  

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第二天：用目標病毒的系列稀釋液感染細胞，并添加覆蓋培養基。在顯微鏡下觀察噬斑的形成  

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第四天至第十六天：固定和染色細胞  

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計數陽性噬斑并計算病毒滴度  

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試劑盒組成（常溫運輸）

1. CytoSelect?瓊脂粉（部件號113001）：一瓶1.2克  

2. 10倍固定液（部件號51911A）：一瓶20毫升  

3. 細胞染色液（部件號51912A）：一瓶30毫升  

未提供材料

1. 目標細胞和病毒  

2. 2倍細胞培養基和無菌DPBS  

3. 無菌細胞培養級水  

4. 微波爐或加熱塊  

5. 水浴鍋  

6. 顯微鏡  

保存方法

將所有試劑盒組分保存在室溫下。

結果示例

以下圖表展示了典型的滴定結果。以下數據僅供參考，不應用于解釋實際結果。

圖：流感A型和B型病毒在MDCK細胞中的噬斑測定  

使用不同稀釋度的流感A型（A面板）和B型（B面板）病毒培養液感染MDCK細胞72小時。

文獻參考：

1. Baer, A. & Kehn-Hall, K. (2014) Viral concentration determination through plaque assays: using traditional and novel overlay systems. J. Vis. Exp. 93, 52065.

2. Wen, Z. et al. (2019) Development and application of a higher throughput RSV plaque assay by immunofluorescent imaging. J. Virol. Methods 263, 88–95.

3. Mendoza, E. J., Manguiat, K., Wood, H. & Drebot, M. (2020) Two detailed plaque assay protocols for the quantification of infectious SARS-CoV-2. Curr. Protoc. Microbiol. 57, cpmc105.

4. Blaho, J. A., Morton, E. R. & Yedowitz, J. C. (2006) Herpes simplex virus: propagation,quantification, and storage. Curr. Protoc. Microbiol. 14, E.1.1–E.1.23.

5. Cruz, D. J. M. & Shin, H.-J. (2007) Application of a focus formation assay for detection and titration of porcine epidemic diarrhea virus. J. Virol. Methods 145, 56–61.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業城市圣迭戈（San Diego），是有名的細胞學試劑品牌，作為前沿的細胞學分析檢測試劑盒生產商，為生物技術和研究類客戶提供好的基于細胞功能研究以及疾病等方面的g端產品和技術服務。產品主要涵蓋細胞研究、細胞信號通路和蛋白質生物學、代謝研究、病原體和毒素、干細胞研究等領域。全球眾多大學、政府研究機構、生物、制藥企業的科研實驗室均在使用Cell Biolabs的產品。  

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