CALS12/PMR4（胼胝質合酶12）參與孢子體和配子體發(fā)育，是正常葉片發(fā)育和創(chuàng)傷和病原體攻擊誘導的胼胝質形成所必需的。替代名稱：1,3-β-葡聚糖合酶，蛋白葡聚糖合成酶樣5，蛋白粉MILDEW抗性4。

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抗CALS12/PMR 4|胼胝質合成酶12：

免疫原：來自擬南芥（Arabidopsis thaliana）CALS12蛋白序列的KLH偶聯(lián)肽，UniProt: Q9ZT82，TAIR: At4g03550

宿主：兔

克隆性：多克隆

純度：抗原親和純化血清，在PBS pH 7.4中

格式：凍干

數(shù)量：50 微克

復溶：復溶時加入50 微升無菌水。

儲存：凍干/復溶后儲存于-20°C；一旦復溶，請分裝以避免反復凍融。請記住，在打開管子前短暫離心以避免由于凍干物質粘附在管蓋或管壁上而造成的任何損失。

測試應用：西方印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1000（WB）

預期|表觀分子量：206.9 | 185 kDa

確認反應性：擬南芥

預測反應性：Capsella rubella, Camelina sativa, Eutrema salsugineum, Brassica napus, Brassica oleracea, Brassica rapa, Tarenaya hassleriana

樣本：

1: Col-0 – 總蛋白提取物

2: pmr4-1/cals12 – 總蛋白提取物

3: Col-0 – 可溶性蛋白分數(shù)（S100）

4: pmr4-1/cals12 – 可溶性蛋白分數(shù)（S100）

5: Col-0 – 微粒體蛋白分數(shù)（P100/M）

6: pmr4-1/cals12 – 微粒體蛋白分數(shù)（P100/M）

從60株擬南芥幼苗（10天大）的Col-0（野生型；第1、3、5條）和pmr4-1/cals12空突變體[參考文獻1]（第2、4、6條）中分離出總蛋白。使用差速離心，將總蛋白分數(shù)（第1、2條）分離成可溶性蛋白（S100；第3、4條）和微粒體蛋白（M/P100；第5、6條），如我們實驗室之前發(fā)表的[參考文獻2]。蛋白質在65°C下變性5分鐘。30微克蛋白質在8% SDS-PAGE上分離，并在55V下使用槽式轉移系統(tǒng)轉移到硝酸纖維素膜上70分鐘。用1x PBS + 0.1% Tween 20（PBS-T）+ 5%牛奶在室溫（RT）下攪拌1小時進行封閉。為了測試AgriSera（AS21 4567）的初級α-CalS12/PMR4，使用了圖示中指示的不同稀釋度的抗體。用α-CNX1/2（AS12 2365，膜ER）和α-MPK6[參考文獻1]探測的膜部分作為裝載對照。在1x PBS-T + 5%牛奶中，用初級抗體在4°C下攪拌過夜。倒掉初級抗體溶液后，用1x PBS-T在RT下攪拌4次（每次6-8分鐘）洗滌膜，然后再用二級抗體山羊抗兔IgG（H&L）-HRP偶聯(lián)（AS09 602-試驗）稀釋至1:20,000在1x PBS-T + 5%牛奶中攪拌2小時。如上所述洗滌膜，并用化學發(fā)光檢測試劑ECL Bright（AS16 ECL-N）顯影4分鐘。X光膠片的曝光時間在圖中指示。

感謝Kelly Mason和Antje Heese；密蘇里大學，生物化學系，IPG（美國）

文獻參考：

[1] Mason K, Ekanayake G, Heese A (2020). 擬南芥子葉和葉片中callose的染色和自動化圖像定量。方法細胞生物學：植物細胞生物學160:181-199。

[2] LaMontagne, E.D., Collins, C.A., Peck, S.C. 和 Heese, A. 2016. 擬南芥微粒體膜蛋白的分離。Curr. Protoc. Plant Biol. 1:217-234. doi: 10.1002/cppb.20020

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