胰島素依賴型糖尿病（IDDM），1型，是由胰腺β細(xì)胞的自身免疫性破壞引起的（1,2）。這種選擇性自身免疫性肝切除導(dǎo)致胰島素分泌w全消除。IDDM血清中特異性胰島細(xì)胞自身抗體的存在證明了免疫證據(jù)（3）。在1型糖尿病患者中，已經(jīng)鑒定出至少三種針對(duì)胰島細(xì)胞抗原成分的自身抗體。這些自身抗體特異性地針對(duì)胰島細(xì)胞抗原成分（4）、g氨酸脫羧酶（5）和胰島素（6）。g氨酸脫羧酶（GAD）是神經(jīng)遞質(zhì)抑制劑γ-氨基丁酸（GABA）的生物合成酶（7）。兩種形式的GAD，6.5 KDa和67 KDa，由一個(gè)基因產(chǎn)生，高度同質(zhì)（8-10）。在腦和胰島細(xì)胞中鑒定出65 KDa-GAD和67 KDa-GAD，在人類、大鼠和小鼠胰腺中差異表達(dá)（11,12）。GAD ELISA試劑盒是一種體外定性ELISA檢測(cè)方法，用于檢測(cè)g氨酸脫羧酶（GAD）抗原的循環(huán)自身抗體。這個(gè)工具包僅供研究使用。它不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦ALPCO熱銷產(chǎn)品g氨酸脫羧酶(GAD) ELISA, 96孔。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

g氨酸脫羧酶(GAD) ELISA, 96孔檢測(cè)原理：

純化的GAD抗原固定在微孔上。允許血清樣本中存在的GAD特異性IgG抗體與抗原反應(yīng)。多余/未結(jié)合的血清蛋白從微孔中洗掉。一種酶（堿性磷酸酶）標(biāo)記的山羊抗體，對(duì)人IgG具有特異性，被添加到GAD抗體復(fù)合物中。從微孔中洗掉多余的未反應(yīng)的酶偶聯(lián)物后，加入底物（PNPP），用分光光度法測(cè)量產(chǎn)生的顏色。顏色的強(qiáng)度直接給出了測(cè)試血清樣本中GAD自身抗體的濃度。GAD陽(yáng)性和陰性控制作為內(nèi)部質(zhì)量控制，以確保有效結(jié)果。

預(yù)防措施：

1. 不要冷凍測(cè)試試劑，始終將所有試劑盒組分存放在2-8°C的環(huán)境中。

2. 每次進(jìn)行測(cè)試時(shí)，都必須運(yùn)行陽(yáng)性和陰性對(duì)照。

3. 只使用清晰的血清作為測(cè)試樣本。測(cè)試樣本不應(yīng)有嚴(yán)重的渾濁、溶血或微生物污染。

4. 所有樣本都應(yīng)進(jìn)行雙重分析。

5. 不要混合不同批次的試劑。

6. 不要使用過(guò)期的試劑。

7. 不要讓試劑在室溫下長(zhǎng)時(shí)間放置。

8. 不要讓底物溶液暴露在光線下。

9. 為了獲得可重復(fù)和準(zhǔn)確的結(jié)果，需要精確的移液技術(shù)。

提供的物料：

1. PLA GAD = GAD-微孔板條（帶支架），12條

2. CONJ ENZ 6X = GAD-酶結(jié)合物（濃縮液），2 x 1.0 ml

3. DIL SPE 5X = y本稀釋液（濃縮液），1 x 25.0 ml

4. CONJ ENZ DIL = 結(jié)合物稀釋液，1 x 10.0 ml

5. CAL GAD CAL 1-3 = GAD-校準(zhǔn)品（1,2,3）（人血清），1 x 1.5 ml

6. CTRL - GAD = GAD-陰性對(duì)照（人血清），1 x 1.5 ml

7. CTRL + GAD = GAD-陽(yáng)性對(duì)照（人血清），1 x 1.5 ml

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 ml

9. BUF WASH 25X = 洗滌緩沖液（濃縮液），1 x 20.0 ml

10. SOLN STP = 終止液（1N氫氧化鈉），1 x 6.0 ml

額外需要但未提供的物料：

1. 蒸餾水或去離子水。

2. 吸水紙巾，用于洗滌后吸干條帶，以及在孵育期間覆蓋條帶的Parafilm/塑料薄膜。

3. 適合血清稀釋的合適尺寸的玻璃管。

4. 微量移液管和一次性吸頭，用于遞送10 ?l、50 ?l和100 ?l。

5. 微孔板洗滌器或擠壓瓶用于洗滌。

6. 用于遞送結(jié)合物稀釋液的1-5 mL移液管。

7. 500 mL量筒。

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板讀數(shù)器。

9. 離心機(jī)。

10. 塑料標(biāo)簽?zāi)z帶，用于在檢測(cè)前封貼未使用的孔。

11. 計(jì)時(shí)器

樣本收集：

通過(guò)靜脈采血5-10 ml，放入凝血（紅色頂部）管中。可以使用血清分離器。通過(guò)離心分離血清。血清樣本可以存放在2-8°C。測(cè)試樣本中過(guò)多的溶血和大x塊或微生物生長(zhǎng)的存在可能會(huì)干擾測(cè)試的性能。如果血清樣本在24小時(shí)內(nèi)無(wú)法分析，請(qǐng)將其冷凍在≤ -20°C。

文獻(xiàn)參考：

1. Cooke, A. (1990). An overview on the possible mechanism of destruction of theinsulin-producing beta cell. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 164:125-142.

2. Harrison, L.C., I.L. Campbell, P.G. Colman, et al (1990). Type 1 diabetes:Immunology andImmunotherapy. Adv. Endocrinol. Metab. 1:35-94.

3. Bottazzo, G.F., A. Florin-Christensen, and D.Doniach ( 1974). Islet cellantibodies in diabetes mellitus with autoimmune polyendocrine deficiencies.Lancet, ii:1279-1283. 

ALPCO產(chǎn)品種類多樣，可測(cè)樣品來(lái)源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經(jīng)生物學(xué)、骨代謝、心血管疾病和氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、糖尿病和肥胖癥、內(nèi)分泌學(xué)、甲狀腺功能、腸胃病學(xué)、免疫學(xué)、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個(gè)研究領(lǐng)域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領(lǐng)域見長(zhǎng)。

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