甘油三酯（TAG）是血液中的一種脂質(zhì)，作為能量來(lái)源，并在代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。甘油三酯是消化過(guò)程中分解膳食脂肪的最終產(chǎn)物。任何未被立即使用的多余碳水化合物和脂肪都會(huì)化學(xué)轉(zhuǎn)化為甘油三酯。在腸道中，分泌的酶脂肪酶水解甘油三酯的酯鍵，產(chǎn)生甘油和游離脂肪酸，這一過(guò)程稱為脂肪分解。腸上皮細(xì)胞隨后吸收并重新包裝這些片段，并與膽固醇結(jié)合形成乳糜微粒，一種主要的脂蛋白運(yùn)輸顆粒。在肝臟中，肝脂肪酶也會(huì)分解甘油三酯，以從甘油三酯、膽固醇和載脂蛋白中組裝另一種脂蛋白顆粒（VLDL）。血漿甘油三酯水平通過(guò)VLDL和乳糜微粒顆粒的組裝和降解來(lái)調(diào)節(jié)。脂蛋白脂肪酶（LPL）是負(fù)責(zé)水解這些顆粒中甘油三酯核心的關(guān)鍵血漿脂肪酶。

艾美捷脂蛋白脂酶(LPL)活性測(cè)定試劑盒（#STA-610）利用一種熒光甘油三酯類似物作為脂肪酶底物。當(dāng)未被水解時(shí)，底物保持在非熒光、猝滅狀態(tài)；然而，當(dāng)在sn-1位置被LPL水解時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一種可被熒光微孔板讀取器測(cè)量的熒光產(chǎn)物（激發(fā)波長(zhǎng)480-485納米/發(fā)射波長(zhǎng)515-525納米，建議截止波長(zhǎng)495納米）（見(jiàn)測(cè)定原理）。脂蛋白脂肪酶（LPL）活性測(cè)定試劑盒是一種簡(jiǎn)單的熒光測(cè)定法，可在96孔微孔板格式中定量測(cè)量血漿、血清和裂解液中的LPL活性。每套試劑盒提供的試劑足以進(jìn)行多達(dá)100次測(cè)定，包括空白、LPL標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣本。試劑盒包含LPL標(biāo)準(zhǔn)品，檢測(cè)靈敏度限為約1毫單位/毫升（見(jiàn)試劑盒組成中的單位定義）。除了LPL，該測(cè)定還可用于檢測(cè)內(nèi)皮脂肪酶和肝脂肪酶活性。

相關(guān)產(chǎn)品：

1. STA-375：尿酸/尿酸酶測(cè)定試劑盒

2. STA-390：總膽固醇測(cè)定試劑盒

3. STA-391：HDL和LDL/VLDL膽固醇測(cè)定試劑盒

4. STA-397：血清甘油三酯定量試劑盒（熒光法）

5. STA-399：游離甘油測(cè)定試劑盒（熒光法）

脂蛋白脂酶(LPL)活性測(cè)定試劑盒組成（干冰運(yùn)輸）：

1. LPL熒光底物（部件編號(hào)261001）：一個(gè)20微升琥珀色試管。

2. 10倍LPL測(cè)定緩沖液（部件編號(hào)261002）：兩個(gè)1.5毫升試管。

 注意：該緩沖液不含鈣或鎂。

3. 終止液（部件編號(hào)261003）：兩個(gè)1.5毫升試管。

4. LPL酶標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號(hào)261004）：一個(gè)25微升試管，濃度為2500單位/毫升。

 注意：一個(gè)單位對(duì)應(yīng)于在pH 8.0和40攝氏度下，使用三油酸甘油酯作為底物時(shí)，每分鐘釋放1微摩爾油酸的酶量。

未提供的材料：

1. 標(biāo)準(zhǔn)96孔熒光黑色微孔板

2. 37攝氏度培養(yǎng)箱

3. 配備激發(fā)濾光片（480-485納米）和發(fā)射濾光片（515-525納米）的熒光微孔板讀取器（建議截止波長(zhǎng)495納米）

儲(chǔ)存條件：

將整個(gè)試劑盒儲(chǔ)存于-80攝氏度。通過(guò)分裝避免反復(fù)凍融。LPL熒光底物對(duì)光敏感，應(yīng)保存在琥珀色試管中。

試劑準(zhǔn)備：

- 1倍LPL測(cè)定緩沖液：用去離子水將10倍LPL測(cè)定緩沖液稀釋至1倍。攪拌至均勻。

- LPL熒光底物：在測(cè)定準(zhǔn)備期間，將LPL熒光底物在室溫下解凍。使用前，用1倍LPL測(cè)定緩沖液將LPL熒光底物稀釋1:500。短暫渦旋至均勻。不要儲(chǔ)存稀釋后的溶液。

 注意：對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，LPL熒光底物應(yīng)分裝并冷凍于-80攝氏度，以避免反復(fù)凍融。

- 終止液：在37攝氏度下解凍終止液。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，終止液可在室溫或4攝氏度下保存。如果出現(xiàn)結(jié)晶，可在37攝氏度下短暫加熱溶液以重新溶解。

樣本準(zhǔn)備：

- 血漿：用抗凝劑（如肝素、檸檬酸鹽或EDTA）收集血液，并通過(guò)倒置混合。在4攝氏度下以1000×g離心10分鐘。收集血漿上清液，避免干擾白色白細(xì)胞層。樣本應(yīng)立即檢測(cè)或在-80攝氏度下冷凍保存，最長(zhǎng)可達(dá)1個(gè)月。在測(cè)定前，血漿必須用1倍LPL測(cè)定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 血清：在無(wú)抗凝劑的試管中收集血液。讓血液在室溫下凝固30分鐘。以2500×g離心20分鐘。小心移除黃色血清上清液，避免干擾白色白細(xì)胞層。樣本應(yīng)立即檢測(cè)或在-80攝氏度下冷凍保存，最長(zhǎng)可達(dá)1個(gè)月。在測(cè)定前，血清必須用1倍LPL測(cè)定緩沖液稀釋1:50至1:200。

- 細(xì)胞裂解液：通過(guò)以1000×g離心10分鐘收集10×10?個(gè)細(xì)胞。棄去上清液，用1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉重懸細(xì)胞。勻漿或超聲處理細(xì)胞懸浮液。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時(shí)使用。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，將裂解液在-80攝氏度下冷凍保存，最長(zhǎng)可達(dá)1個(gè)月。在測(cè)定前，細(xì)胞裂解液必須用1倍LPL測(cè)定緩沖液進(jìn)一步稀釋1:20或更高。

- 組織樣本：稱取200毫克組織并切成小塊。用冷PBS沖洗組織以去除紅細(xì)胞和x塊。在1毫升冷20毫摩爾/升Tris（pH 7.5）、150毫摩爾/升氯化鈉中勻漿處理切碎的組織。在4攝氏度下以10,000×g離心10分鐘。小心收集上清液，置于冰上以供即時(shí)使用。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，將勻漿在-80攝氏度下冷凍保存，最長(zhǎng)可達(dá)1個(gè)月。在測(cè)定前，細(xì)胞裂解液必須用1倍LPL測(cè)定緩沖液進(jìn)一步稀釋1:100或更高。

結(jié)果示例：

下圖展示了典型的LPL活性測(cè)定試劑盒結(jié)果。使用SpectraMax Gemini XS熒光光度計(jì)（Molecular Devices）在485/525納米濾光片組和495納米截止波長(zhǎng)下進(jìn)行熒光測(cè)量。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實(shí)際結(jié)果。  

脂蛋白脂肪酶標(biāo)準(zhǔn)曲線

脂蛋白脂酶(LPL)活性測(cè)定試劑盒文獻(xiàn)參考：

1. Goldberg, I. J., and M. Merkel (2001) Front Biosci 6: D388-405.

2. Olivecrona, G., and T. Olivecrona (2010) Curr Opin Lipidol 21: 409-415.

3. Wang, H., and R. H. Eckel (2009) Am J Physiol Endocrinol Metab 297: E271-288.