ADI猴IgM ELISA試劑盒標本的采集和處理：

通過靜脈穿刺采集血液，使其凝固，并在室溫下離心分離血清溫度。不要加熱使血清失活。如果血清沒有立即檢測，請儲存冷藏長達2周或冷凍長期儲存。避免凍融循環。血漿的使用尚未進行調查，但應該是一個合適的檢測樣本。

艾美捷猴IgM ELISA試劑盒：

貨號：ADI-7060

特異性：本試劑盒中使用的抗體已通過免疫電泳和ELISA證明能特異性地與IgM反應，并且與IgG、IgA、IgE或其他任何猴血清蛋白幾乎沒有反應性。

以下物種的血清在1:400稀釋下沒有顯示出顯著的反應性：

小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、牛、豬、馬、羊、山羊、狗、貓、兔子或雞；還有10%的新生牛血清。人血清顯示出廣泛的交叉反應性。

正常范圍：對14只個體恒河猴、食蟹猴和狒狒的儲存血清中的IgM進行檢測，其范圍從0.2到3.8 mg/ml（中位數=1.85 mg/ml）。每個實驗室應確定其自身測試群體的預期值。

精確度：含有低、中、高濃度IgM的樣本，代表3個不同物種，在同一個檢測中多次檢測（n=10）以提供檢測內的精確度，并作為多個檢測中的重復樣本（n=5）以獲得檢測間的可重復性。使用點對點曲線擬合程序計算濃度的變異系數。

IgM濃度的測量顯示出良好的檢測內（5.3至7.8% CV）和檢測間（4.2至16.2% CV）的可重復性。

檢測程序：

將所有試劑平衡至實驗室溫度（18-30攝氏度）至少30分鐘。

稀釋血清樣本至工作樣本稀釋液中。對于大多數正常的猴血清，大約4000倍的稀釋是合適的。為了準確性，推薦進行兩個稀釋步驟，如下：

1) 10μl血清 + 990μl稀釋液 = [1:100]，

2) 25μl [1:100] + 975μl稀釋液 = [1:4000]。

不要稀釋標準品或陽性對照血清。

結果計算：

1. 結果可以使用任何免疫分析軟件包來計算。推薦使用四參數曲線擬合。如果沒有軟件可用，可以按照以下方法確定IgM濃度：

2. 計算重復樣本的平均OD值。

3. 在坐標紙上，將標準品的平均OD值（y軸）與IgM的濃度（ng/ml）（x軸）作圖。通過這些點繪制最佳擬合曲線以構建標準曲線。點對點的構建是最常見和可靠的方法。

4. 可以通過標準曲線的插值來確定未知樣本和對照中的IgM濃度。

5. 將樣本獲得的值乘以每個樣本的稀釋因子。

6. 對于產生高于1000 ng/ml標準信號的樣本，應進一步稀釋并重新檢測。

注意事項和安全指南：

猴血清可能含有人畜共患的、跨物種的傳染性物質。在處理含有血清的樣本（包括標準品和對照品）時，始終要戴手套，并把這些樣本和容器作為生物危害廢物進行處理。

校準液、樣品稀釋液和HRP標記抗體含有溴硝基二氧六環（BND：0.05%，重量/體積）。

終止液含有稀釋的硫酸。請遵循良好的實驗室操作規范，避免任何試劑與皮膚、眼睛或黏膜接觸。所有試劑都可以用大量水沖入下水道。TMB、硫酸和BND的MSDS（材料安全數據表）可以從ADI網站索取或獲得：樣品稀釋液和抗蛋白G-HRP含有Proclin 300（0.05%，體積/體積）。

質量控制：

準確和可重復的檢測結果依賴于試劑和樣本的正確儲存、處理以及溫度控制。按照指示儲存所有試劑，并僅將用于檢測的試劑回暖至室溫。關鍵試劑和樣本的保質期會因長時間暴露在非冷藏條件下而縮短，導致檢測結果不準確。

所有溶液應清澈。渾濁或有顆粒物是試劑污染或不穩定的跡象，可能會干擾檢測的正確進行。如出現這種情況，請勿使用。

樣本對照品 試劑盒中提供了一個陽性血清對照品，并附有IgM濃度值范圍。在此范圍內的回收率是檢測性能良好的指標。

每個實驗室還應檢測內部對照樣本，這些樣本代表實驗室預期的樣本群體，并且是穩定的。也應該運行一個樣品稀釋液陰性對照。

標準曲線 標準品產生的信號應該從低標準品到高標準品連續增加OD值，且差異大于1.2 OD。

非連續增加或低信號可能表明技術、協議指導和/或試劑準備、使用或穩定性存在問題。陰性稀釋液對照的信號應低于低標準品。不要依賴于存在這些問題的檢測結果。

技術 準確和可重復的檢測結果依賴于良好的實驗室技術，包括移液、板洗滌和樣本及試劑的處理。