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ALPCO高效IVD檢測方案:完整甲狀旁腺EIA(96孔),IVD使用

時間:2024/9/13閱讀:125
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甲狀旁腺激素(PTHParathyroid hormone, Parathormone, Parathyrin)最初在甲狀旁腺中以較大的分子前體形式——前前甲狀旁腺激素生物合成,由115個氨基酸組成。在細胞內經過順序性剪切掉25個氨基酸序列后,前前甲狀旁腺激素轉化為一個中間產物,即由90個氨基酸組成的多肽,前甲狀旁腺激素。通過額外的蛋白水解修飾,前甲狀旁腺激素隨后轉化為甲狀旁腺激素,這是一個由84個氨基酸組成的多肽。在健康個體中,甲狀旁腺激素的分泌通常通過血清鈣對甲狀旁腺的負反饋作用進行調節(jié)。完整的PTH具有生物活性,并且在循環(huán)中非常迅速地清除,半衰期不到四分鐘。PTH在甲狀旁腺中發(fā)生蛋白水解,但主要在外圍發(fā)生,特別是在肝臟,也在腎臟和骨骼中,產生N-末端片段以及壽命更長的C-末端和中間區(qū)域片段。在腎功能不全的個體中,C-末端和中間區(qū)域PTH檢測通常顯示PTH結果升高,這反映了腎臟清除能力受損。

 

完整PTH ELISA用于定量測定人血清中的完整PTH(甲狀旁腺激素)。該試驗旨在用于美國的體外診斷。

 

艾美捷完整甲狀旁腺EIA(96)IVD使用ALP-21-IPTHU-E01)檢測原理

完整PTH免疫測定是一種雙位點ELISA[酶聯(lián)免疫吸附測定],用于測量PTH的生物完整84個氨基酸鏈。通過親和層析純化了兩種不同的山羊多克隆抗人PTH抗體,使其對PTH分子上明確界定的區(qū)域具有特異性。生物素化的捕獲抗體僅結合中間區(qū)域和C末端PTH 39-84。辣根過氧化物酶標記的檢測抗體僅結合NPTH 1-34

 

完整的PTH 1-84通過與生物素標記的捕獲抗體和HRP標記的檢測抗體結合,形成檢測所需的夾心復合物。生物素標記的抗體和包被鏈霉親和素的微孔板的容量都經過調整,以顯示出即使在非常高的水平下,對非活性片段的干擾也是微不足道的。

 

在這個測定中,校準品、對照品或患者樣本與酶標記的抗體和生物素偶聯(lián)的抗體一起在包被鏈霉親和素的微孔板孔中同時孵育。在測定孵育結束時,微孔板被洗滌以去除未結合的成分。洗滌后,微孔板與底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)一起孵育。在HRP酶的存在下,TMB底物轉化為藍色。然后添加酸性停止溶液以停止反應,并將顏色變?yōu)辄S色。黃色的強度與樣本中完整PTH的濃度直接成正比。使用從校準品獲得的結果生成吸光度單位與濃度的劑量反應曲線。對照品和患者樣本中存在的完整PTH的濃度直接從這個曲線上確定。

 

完整甲狀旁腺EIA(96)IVD使用試劑盒組成:

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樣本收集和儲存:

完整PTH的測定應使用人類血清進行。為了雙重測定樣本,需要50微升的血清。收集不含抗凝劑的全血。在血液凝固后,應盡快分離出血清,最好在冷藏離心機中進行,并盡快進行測試。如果血清樣本不能立即進行測試,應儲存在-20°C或更低溫度下。在-20°C下冷凍的血清樣本可穩(wěn)定保存長達4個月。

 

完整甲狀旁腺EIA(96)IVD使用文獻參考:

1. Segre, G.V., Niall H.D., Habener J.F. et. al.: Metabolism of parathyroid hormone: physiological andclinical significance. Am. J. Med. 56: 774,1974.

2. Mallete, L.E., Gagel, R.F.: Parathyroid Hormone and Calcitonin. In: Murray J.F. (ed) Primer on theMetabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism. American Society for Bone andMineral Research, Kelseyville; William Byrd Press, Richmond, pp. 65-69, 1990.

3. Bilezikian, J.P.: Primary Hyperparathyroidism. In: Murray J.F. (ed) Primer on the Metabolic BoneDiseases and Disorders of Mineral Metabolism. American Society for Bone and Mineral Research,Kelseyville; William Byrd Press, Richmond, pp. 109-111, 1990.


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