Comet Assay Kits 彗星分析試劑盒是什么,有什么作用,一起來分析一下吧!
首先來看看常用和高通量篩選這兩種:
Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)(常用),規格15 assays(5片/25片/5*25片)
Comet Assay Kits, 96-Well(96孔玻片)(高通量篩選),規格(1片/5片)
*為方便客戶使用試劑盒,艾美捷科技善意將其翻譯成中文操作手冊,請以試劑盒中配套的英文版為準。因編者翻譯水平有限,對于由本說明書中不當翻譯所造成的損失,概不負責,如有錯誤,歡迎指正!
實驗開始前,建議先通讀說明書(主要以試劑盒中配套的英文版為準):
背景:由于環境因素和細胞內正常的新陳代謝過程,DNA損傷每天以每個細胞1000到100萬個分子損傷的速度發生。雖然這只占人類基因組約60億個堿基(30億個堿基對)的一小部分,但關鍵基因的未修復損傷可能會阻礙細胞發揮其功能的能力,并顯著增加癌癥的可能性。彗星實驗(Comet assay)也被稱為單細胞凝膠電泳實驗(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一種超靈敏的單細胞水平上檢測DNA損傷的技術。在電泳場下,損傷的細胞DNA(包含碎片和鏈斷裂)從完整的DNA中分離出來,在顯微鏡下形成典型的“彗星尾巴”形狀。DNA損傷的程度通常是通過測量彗星尾巴來目測的,也可以使用圖像分析軟件來測量各種參數。
OxiSelect™ Comet Assay是一種快速、靈敏的,用于測量細胞DNA損傷的試劑盒。每個試劑盒提供足夠的試劑,可進行15次檢測。
實驗原理:Cell Biolabs 的 OxiSelect™ Comet Assay 是一種單細胞凝膠電泳法 (SCGE),用于簡單評估細胞 DNA 損傷。首先,將單個細胞與低熔點瓊脂混合后,再應用到OxiSelect™ Comet特制玻片上。然后,用裂解緩沖液和堿性溶液處理這些嵌入的細胞,使DNA松弛并變性。在電泳槽中對進行電泳,以分離完整的DNA和受損的片段。電泳后,樣品被干燥,用DNA染料染色,并通過外顯熒光顯微鏡可視化。在這些條件下,受損的DNA(包含裂解和鏈斷裂)將比完整的DNA遷移更多,并產生 "彗星尾 "形狀(見下圖)。
彗星實驗原理與流程示意圖
自備材料:
1.氯化鈉粉末
2.NaOH顆粒
3.10 N NaOH,用于調整pH值 (10 N NaOH = 10 M NaOH =10 mol/L NaOH)
4.DMSO(可選)
5.70%乙醇
6.TE緩沖液(10mM Tris,pH 7.5,1mM EDTA)。
7.PBS(不含Mg2+和Ca2+)。
8.EDTA(二鈉鹽)
9.DI H2O(去離子水)
10.37ºC和沸水浴
11.水平電泳槽
12.可調節的單通道微量移液器,帶一次性吸頭。
13.帶FITC過濾器的外顯熒光顯微鏡
保存條件:收到試劑盒后,將綠色熒光DNA染料,10000X存放在-20ºC。 所有其他試劑盒組件在室溫下儲存。
關于實驗步驟,因為篇幅有限,大家感興趣的可以搜一下原文,也可以留言哦~
文章來源:
艾美捷科技
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