關于核酸檢測,方法還是挺多的,比如常用的分光光度法,和熒光染料法。
一、分光光度法
此法不具有選擇性,無法區分DNA、RNA或蛋白質。檢測數值J易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機化合物)和堿基組成差異的影響。
二、熒光染料法
也是今天要重點介紹的,有哪些熒光染料,可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結合,并在特定波長光源的激發下,發出熒光,并且不會檢測到樣本中可能存在的其他雜質分子,熒光強度與樣品中的靶分子濃度相對應呢?
一起來看看吧:
首先,是 DNA和RNA定量試劑
Helixyte Green dsDNA定量試劑(17597)和StrandBrite Green RNA定量試劑(17611)分別對雙鏈DNA和單鏈RNA進行了優化。它們對核酸有很高的親和力,對結合核酸有J大的熒光增強作用,使得在幾分鐘內直接檢測復雜溶液中微量核酸成為可能,而且一般不會受到其他生物分子的干擾。
小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen 具有幾乎相同的性能。
Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑,與dsDNA結合后可顯著增強熒光。其優勢如下:
高靈敏度:Helixyte Green和StrandBrite Green的靈敏度比UV吸收率測定法高10,000倍
選擇性高:與紫外吸收的測量不同,這些檢測不受蛋白質,游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響,從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復雜混合物(例如血清或全血)中更加準確。
操作簡單:這些檢測方法非常簡單,不需要分離步驟,因此非常適合自動化,高通量篩選
檢范圍廣:對于Helixyte Green的檢測,定量在四個數量級內都是準確的。基于StrandBrite 的熒光檢測在三個數量級上都是準確的。
1、dsDNA定量
Hoechst 33258,超級純,#AAT-17520
Hoechst染料是一類在顯微觀察中標記DNA的熒光染料。因為這類熒光染料能標記DNA,所以它們也經常用于細胞核和線粒體的顯像觀察。這類染料中兩個相關的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經常使用。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發,都在461nm處大發射光附近發射藍/青色熒光。Hoechst染料可以用于活細胞或者固定化細胞,并且經常用來代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關鍵的不同點在于,與DAPI相比,Hoechst 33342加有乙基,這使它具有更強的親脂性,因此能更好的透過完整的細胞膜。在一些實驗中,Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些。這些染料也可以用來檢測樣品中的DNA含量,通過繪制發射光強度與DNA含量的標準曲線。
2.RNA定量
StrandBrite 綠色RNA定量試劑,200X DMSO 溶液,#AAT-17610
檢測和定量小量RNA在各種分子生物學應用中尤其重要,比如定量體外RNA轉錄及測量RNA濃度在準備進行Northern印記雜交,S1p核酸酶分析,RNA酶保護分析,cDNA文庫制備,逆轉錄PCR及DD-PCR。常用的是測定核酸濃度技術,在260nm處測定吸光度。基于吸光度的方法主要的缺點是來自蛋白、游離核苷酸及其他紫外線吸收化合物的干擾。利用靈敏的帶熒光的核酸染色劑可減輕這種干擾狀況。StrandBrite RNA定量試劑是一種可在溶液中對RNA進行定量檢測的超靈敏的熒光核酸染色劑。StrandBriteRNA定量試劑可檢測出濃度低至 5 ng/mL的RNA通過熒光酶標儀或熒光光度計。
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