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Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時特異性強,重復性好的實驗檢測方法,由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。 目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競爭法。 四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優劣:
通常我們在選擇所需要的Elisa試劑盒時主要會從以下幾個方面進行選擇: Elisa試劑盒選擇原則:
Elisa試劑盒質量到底怎樣?檢測結果的可信度高不高? Elisa試劑盒評價標準: ① 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,應大于等于0.9900。 ② 靈敏度:反應試劑盒的*低檢測濃度 ③ 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。 ④ 重復性:板內、板間變異系數 ⑤ 回收率:判斷實驗的準確性和特異性 Elisa試劑盒的標準曲線: 標曲R值是幾個9才合格? 實驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無具體的要求,至少使用5個標樣(除空白外)建立線性標準曲線,每個點重復測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關系數不應低于0.98,對于確證方法,相關系數不應低于0.99。 其實,大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準,實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近*高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線性大于0.999的話,在整個線性范圍內都會有一個比較滿意的結果。 如果檢測的線性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近,這樣結果也是非常準確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標準曲線,但線性非常不理想,這時可以將標準范圍調整到15~25ppb之間,作五個標準。 可以檢測檢測各類食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細菌蛋白的ELISA試劑盒: 1.抗生素類:氨芐青霉素,E4350,樣本:血清,尿液,牛奶,組織 檢測食品中抗生素的殘留 樣本類型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本 真菌毒素是真菌產生的低分子量次級代謝產物2.真菌毒素:總黃丨曲丨霉丨毒丨素,E4747,樣本:酒、醬油、醋、谷物、花生、 樣品類型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。 食品受到生物和環境污染物的污染發生在生產和加工的幾個階段3.食品添加劑: 沙丁胺醇,K4209,樣本:豬尿、組織、飼料 樣品類型:牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。 表達蛋白經過幾個純化步驟后,宿主細胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至會與原料藥一起純化和濃縮;樣品類型:細胞裂解液、其他生物液 4.宿主細胞蛋白:CHO 宿主細胞蛋白,E4537,樣本:細胞裂解液,其他生物液體 5.其他毒素:雙酚A(BPA),E4722,樣本:細胞裂解液,其他生物液體 |
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