HL-60人早幼粒白急性血病細胞

 細胞培養注意事項問題解答
 
       細胞培養技術解答
 培養基生產和使用常見問題
1.低血清培養基能用肉眼判斷其pH值嗎？
   答：低血清培養基中酚紅的含量與普通培養基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經驗來判定pH值，建議使用pH計進行測定。
2.低血清培養基的緩沖系統是什么？
   答：平衡鹽一般是由無機鹽及葡萄糖組成的。平衡鹽有Hanks′系統、Earle′s系統、Dulbecco′s磷酸緩沖鹽系統等。199系列培養基、MEM系列培養基均有Hanks′系統的培養基及Earle′s系統的培養基。但是有些培養基均不是以上常規的平衡鹽系統，例如RPMI 1640培養基、F12培養基。MEM(SLM)低血清培養基的平衡鹽系統也不是常規的平衡鹽系統，該平衡鹽系統的緩沖能力強于常規平衡鹽系統的緩沖能力。
3.谷氨酰胺溶液和碳酸氫鈉的配制方法是什么？
   答：以0.2mol/L的 L-谷氨酰胺配制為例：稱取L-谷氨酰胺2.92g，加注射用水100ml，充分攪拌混勻。用0.2μm濾膜正壓過濾除菌。溶液應在4℃下避光保存，2周內使用。以7.5% NaHCO3的配制為例：稱取NaHCO37.5g溶于100ml蒸餾水中過濾除菌。
4.什么培養基中可以省去加酚紅？
   答：酚紅在培養基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質量并不會產生影響，可以通過純化技術去除，但酚紅在無血清培養基可能帶來胞內鈉/鉀失衡，影響細胞生長，當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產企業在生產過程中都使用無酚紅培養基。
5.放置在冰箱中的培養基顏色會發生變化，為什么？
 
     答：培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO2 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO2，以調整pH值。
6.無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？
    答：當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會結合和滅活一些抗生素。而在無血清培養條件下，抗生素不被滅活。
7.培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？
    答：一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
8.什么是個性化培養基？它有什么優點？
    答：根據細胞類型、培養方式和生產工藝等特點所定制的培養基，即個性化培養基。個性化培養基在國外生物制藥企業被普遍采用，個性化培養基可以為細胞生長提供充足的營養物質，能提高細胞的生長速率、培養密度、以及延長細胞維持時間；也可以為細胞生長提供均衡的營養供給，減少細胞有害代謝物質的積累，降低對細胞生長的危害；同時對貼壁細胞而言，能增加細胞的貼壁性，并降低培養過程中剪切力對細胞的損傷；個性化培養基可以根據各戶的特殊需求減少或不使用動物源成分，從而使生物制品安全性更有保障。
9.細胞培養基偶然被凍，可否繼續使用？
    答：如果細胞培養基偶然被凍，您應該自然溶解培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基。
10.細胞冷凍培養基之成份為何？
    答：動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養基是含5 - 10%DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95%原來細胞生長用的新鮮培養基均勻混合。注意：由于DMSO稀釋時會放出大量熱能，故不可將DMSO直接加入細胞液中，必須使用前先行配制完成。
11.培養基及其它添加物和試劑可反復凍融嗎？
    答：大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數過多會將使含有的蛋發生降解和沉淀，這將會影響它的性能。
12.液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？
    答：要冷藏??！通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月到一年。

HL-60人早幼粒白急性血病細胞
貼壁細胞接收后的操作流程與注意事項
1.收到細胞當天盡快更換新鮮*培養基，第二天再進行消化處理
2.如果細胞收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶繼續培養觀察。同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基，培養觀察
3.若出現生長不均：貼壁細胞若出現分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細胞，加入新鮮培養基進行培養

貼壁細胞常規培養傳代流程（請嚴格遵照無菌操作）
1.吸出原培養瓶中的培養基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加適量0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間）
2.鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散
3.取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中，添加適當的*培養基，把細胞懸液打勻，于培養箱中培養
4.注意培養基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項作或者凍存