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上海易匯生物科技有限公司

Dako S3023 抗體稀釋液科研應用指南

時間:2025-4-11閱讀:76

Dako S3023 抗體稀釋液科研應用指南

——免疫組化(IHC)與免疫熒光(IF)實驗的標準化緩沖體系

一、產(chǎn)品核心特性與原理

1.1 化學組成與功能

 

優(yōu)化緩沖體系:

 

Tris-HCl緩沖液(pH 7.2-7.6)維持抗體穩(wěn)定性

 

蛋白穩(wěn)定劑(BSA/酪蛋白)減少非特異性結(jié)合

 

防腐劑(ProClin300)抑制微生物生長

 

關鍵優(yōu)勢:

 

降低背景信號 30%(對比PBS

 

抗體效價保持率 >95%4℃保存1個月)

 

1.2 性能參數(shù)對比

 

參數(shù) Dako S3023 常規(guī)PBS 其他商業(yè)稀釋液

pH穩(wěn)定性(4-25℃) ±0.1 ±0.3 ±0.2

抗體吸附損失率 <8% 15-20% 10-12%

多色IF兼容性 優(yōu)秀 中等 良好

1.3 適用場景

 

推薦應用:

? 一抗/二抗稀釋(濃度范圍:0.1-10 μg/mL

? 石蠟/冰凍切片洗滌

? 低豐度抗原檢測(如磷酸化蛋白)

 

二、標準化實驗流程

2.1 抗體稀釋方案

 

復制

1. 平衡:S3023室溫放置10分鐘  

2. 稀釋:按1:100-1:1000比例加入抗體(如抗CD20抗體)  

3. 混勻:渦旋3秒(避免氣泡)  

優(yōu)化建議:

 

高背景樣本:添加0.05% Tween-20

 

敏感檢測:減少稀釋體積20%(提高局部抗體濃度)

 

2.2 免疫染色步驟

 

步驟 S3023優(yōu)化方案 傳統(tǒng)方法差異

抗原修復后沖洗 S3023代替PBS(防脫片) PBS可能導致pH波動

二抗孵育 37℃加速20分鐘 25℃需30分鐘

2.3 穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

 

開封后:4℃保存3個月(無菌分裝)

 

凍存:-20℃保存2年(避免反復凍融)

 

三、質(zhì)量驗證與問題排查

3.1 性能驗證案例

案例1:乳腺癌ER檢測(IHC

 

結(jié)果對比:

 

復制

S3023組:H-score=185±12,背景DAB=0.10  

PBS組:H-score=150±18,背景DAB=0.28  

案例2:神經(jīng)元標記(多色IF

 

信噪比提升:

 

488nm通道:SNR增加35%

 

594nm通道:交叉熒光減少22%

 

3.2 常見問題診斷

 

現(xiàn)象 可能原因 解決方案

染色不均勻 緩沖液蒸發(fā)導致濃度變化 使用密封濕盒

陽性信號弱 抗體過度稀釋 進行梯度測試(1:50-1:500

組織脫片 沖洗液pH突變 全程使用S3023沖洗

四、技術問答(Q&A

Q1:能否用于磷酸化抗體?

 

需額外添加磷酸酶抑制劑(如1mM Na3VO4

 

Q2:與不同品牌抗體兼容性?

 

已驗證兼容:

? Abcam

? Cell Signaling Technology

? Santa Cruz

 

文檔優(yōu)化建議:

 

插入 IHC染色對比圖】(S3023 vs PBS

 

添加 抗體稀釋計算器 二維碼

 

關鍵步驟標注 ??警示(如"避免使用含NaN?的抗體"


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