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上海易匯生物科技有限公司

Biocolor F2000 彈性蛋白檢測試劑盒科研應用指南

時間:2025-4-10閱讀:74

Biocolor F2000 彈性蛋白檢測試劑盒科研應用指南

——定量組織與細胞外基質中彈性蛋白的精準方案

一、檢測原理與產品優勢

1.1 比色法檢測機制

特異性結合:試劑含 磺酸化四唑鎓鹽,與彈性蛋白的 非極性氨基酸殘基(如Val, Pro, Gly)選擇性結合,形成 紫色復合物(λmax=513nm)。

動態范圍:0.2-50 μg彈性蛋白/樣本(R2>0.99),靈敏度 0.1 μg(優于ELISA法)。

1.2 試劑盒核心組分

組分編號 名稱 作用與特性

F2000-A 提取緩沖液 0.25M NH?OH,溶解交聯彈性纖維

F2000-B 染色試劑 避光保存,反應后OD值與濃度呈線性

F2000-C 洗滌液 0.1% SDS,降低非特異性吸附

1.3 適用樣本類型

推薦樣本:

? 皮膚/血管組織勻漿(建議≤50mg濕重)

? 細胞培養上清(需10倍濃縮)

? 病理切片(需配合顯微分光光度計)

二、標準化實驗流程

2.1 樣本前處理

組織提取協議:

復制

1. 20mg組織加入500μL F2000-A  

2. 95℃加熱2小時(釋放交聯彈性蛋白)  

3. 12,000g離心10分鐘,取上清檢測  

細胞樣本處理:

使用 F2000-A 裂解后,需通過 10kDa超濾管 濃縮

2.2 檢測步驟

復制

1. 加樣:  

  - 標準品/樣本各100μL96孔板(建議復孔)  

2. 染色:  

  - 加入50μL F2000-B37℃避光振蕩30min  

3. 洗滌:  

  - F2000-C沖洗3次(每次200μL)  

4. 檢測:  

  - 513nmOD值(參考波長650nm)  

2.3 數據計算

標準曲線擬合(示例):

復制

濃度(μg)   OD513-OD650  

0           0.012  

5           0.328  

10          0.701  

→ 擬合方程:y=0.068x + 0.011 (R2=0.998)  

三、性能驗證與問題排查

3.1 質量控制指標

合格標準:

? 空白孔OD<0.05

? 標準曲線R2≥0.98

? 批內CV<8%n=3

3.2 典型應用數據

案例1:皮膚衰老研究

年輕vs年老小鼠真皮:

復制

年輕組:12.3±1.2 μg/mg組織  

年老組:6.8±0.9 μg/mg組織(p<0.01)  

案例2:藥物干預效果

TGF-β抑制劑處理組:

彈性蛋白合成增加 2.4倍(vs對照組)

3.3 故障診斷表

現象 可能原因 解決方案

標準曲線線性差 染色時間不足 延長反應至45分鐘

樣本OD值超出范圍 未充分提取 增加加熱時間至3小時

背景值過高 增加至5次洗滌

四、技術問答(Q&A

Q1:能否檢測彈性蛋白降解產物?

可檢測 α-彈性蛋白(使用F2000-A提取),但需注意 elastin peptides 需專用抗體檢測

Q2:與Masson染色相關性?

比色法結果與 Verhoeff染色 陽性面積顯著相關(r=0.89, p<0.001),但與Masson染色無直接可比性

文檔優化建議:

插入 【標準曲線示例圖】(含95%置信區間)

添加 組織提取操作視頻 二維碼

關鍵步驟標注 ??注意(如"避免使用金屬器械"



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