DH5 aλpir感受態細胞*

產品貨名：DH5αλpir Chemically Competent Cell
產品貨號：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
規格/簡介：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)

基因型

F- φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk- ， mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

簡要說明|

CLBio DH5a入pir 菌株來源于DH5a，在DH5a大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5a入pir，該菌株可以表達PIR蛋白，使得含有R6Kg ori 復制子的質?？梢栽谄渲姓椭?。DH5a入pir 菌株缺失核酸內切酶(endA)，提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩定性; lacZOM15 的存在使DH5a可用于藍、白斑篩選;但DH5a入pir 菌株生長速度較慢，在平板培養或液體搖菌時應延長生長時間。CLBio DH5a λpir感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1X109 cfu/ μg DNA。

操作說明：

1. DH5a λpir 感受態細胞從-80°C拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質?；蜻B接產物)并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2.42*C水浴熱激45秒，迅速放回冰.上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μ1不含抗生素的無菌LB培養基，混勻后37°C，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懇菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。

5.將平板倒置放于37°C培養箱至少18小時。

注意事項：

1.感受態細胞建議在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2.DH5aλpir菌株生長緩慢，在平板上培養或液體搖菌時應延長菌體生長時間(37°C， 18 小時以上)。

3.轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。

DH5 aλpir感受態細胞*