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小鼠肺微血管內皮細胞的分離培養方法

閱讀:490      發布時間:2025-2-27
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小鼠肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障,該屏障對于肺氣體交換,調節液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。它還具有代謝功能,可以執行一定的非呼吸功能。在肺損傷中,肺微血管內皮細胞是活性氧類的重要靶細胞之一。

在肺炎的發生過程中,神經體液介質和氧化劑作用于內皮細胞,使得細胞間隙滲透性增加,蛋白質由血液進入間質。細胞間隙滲透性的增加導致低氧血癥,出現成人呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。

小鼠肺微血管內皮細胞來源于實驗動物的正常肺組織,細胞為上皮樣,多角形細胞,貼壁培養,采用CD31免疫熒光染色鑒定為陽性,細胞純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

1.試驗所需儀器設備及試劑

(1)儀器

儀器名稱

規格型號

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

CO2細胞培養箱

BC-J160S

熒光倒置顯微鏡

DS-Ri2

高速冷凍離心機

Multifuge X1R

電熱恒溫鼓風干燥箱

DHG-9123A

電熱恒溫震蕩水槽

DK-2B

(2)試劑耗材

試劑名稱

規格/貨號

T25細胞培養瓶

430639

血球計數板

Neubauer improved

24孔板專用細胞爬片

YA0350

細胞培養孔板

WHB-24

胎牛血清

1414426

內皮細胞培養基

Primed-icell-002

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

2、小鼠肺微血管內皮細胞的分離培養

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中,移入生物安全柜,

2) 從胸部解剖乳鼠,取出雙肺置于預冷的PBS中,盡可能的除去結締組織等,

3) 取肺邊緣部分,剪碎,將組織塊移入T25培養瓶中,倒置于細胞培養箱中,

4) 2h后,培養瓶中注入2 mL內皮培養基,小心將培養瓶正置于培養箱,確保組織塊不會飄起來,

5) 每3d換液2mL,待細胞從組織塊中爬出來后,隔2d換液,待細胞融合達到60-70%左右時,去除組織塊,將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

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