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基因型

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簡要說明

JM109(DE3)菌株來源于JM109，用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區整合于JM109的染色體上，所以稱為JM109(DE3)。可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。JM109(DE3)菌株不可用于藍白斑篩選試驗。JM109(DE3)感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率高于108 cfu /μg DNA。

操作說明

1、JM109(DE3) 感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項

1、感受態細胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3. 誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。

4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。