Stbl3菌株來源于HB101 E.coli strain,是慢病毒載體系統推薦使用的菌株。基因組含有重組酶recA13突變,可有效抑制長片段末端重復區的重組,降低錯誤重組的概率;但不含核酸酶endA1突變,體內核酸酶含量較高,提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有LIAN霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。
High5TM系列Stbl3感受態細胞經特殊工藝制作,經pUC19檢測轉化效率>108cfu/μg DNA。
操作說明:
1.Stbl3感受態細胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中),加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3.向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.培養基或LB培養基(推薦使用SOC培養基,可提高轉化效率)。
4.30℃,225rpm復蘇90分鐘。(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control PUC19計算轉化效率,則需37℃,225rpm復蘇60分鐘。)
5.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.培養基上。
6.將平板倒置放于30℃培養箱過夜培養。(若轉化controlPUC19計算轉化效率,則需37℃培養過夜)
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