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動物源性食品中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷樣品前處理方法
敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷均屬于有機磷農藥，作為一種殺蟲劑，有機磷農藥具有廣譜、高效、低毒、使用方便等特點，廣泛應用于農業、畜牧業、水產、林業等方面的防蟲或殺蟲工作。有機磷農藥的廣泛使用，在給人們增加利益的同時也給環境造成了嚴重的污染。大量食用含有敵百蟲等農藥殘留的食物會導致機體正常生理功能的失調，引起病理改變和毒性危害。因此，為保障動物源性食品的安全，我國農業農村部和國家市場監督管理總局2019年發布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留*》中明確規定了敵百蟲和敵敵畏在牛和豬靶組織中的殘留*。
本文闡述了如何將敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷從樣品基質中分離提取出來，并經過凈化后，轉化成液質聯用儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據國標GB 23200.94-2016，為檢測人員和相關領域研究人員提供一定的參考。
檢測項目：敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷
應用范圍：畜、禽分割肉、鹽漬腸衣和蜂蜜
液相色譜-質譜/質譜法
方法原理：試樣中的敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液經濃縮、脫脂后，用液相色譜-質譜/質譜儀測定，外標峰面積法定量，子離子豐度比定性。
前處理儀器：
分析天平（感量0.01 g 和0.0001 g）；超聲波清洗器；旋渦混勻器；旋轉蒸發儀；離心機（5000 r/min）；均質器；0.45 μm微孔濾膜。
檢測儀器：UHPLC-MS/MS+ESI源
試樣的制備與保存
1. 分割肉
取樣品中有代表性的約500 g，用組織搗碎機搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。
2. 腸衣
取有代表性樣品約100 g，用剪刀剪碎至2 毫米以下，裝入潔凈容器作為試樣，密封并做好標識。
3. 蜂蜜
取有代表性樣品約500 g，攪拌均勻后裝入潔凈容器內密封并做好標識。
試樣保存與制樣要求：分割肉、腸衣、蜂蜜等試樣于零下18 ℃ 以下冷凍保存。在制樣的操作過程中，應防止樣品受到污染或發生殘留物含量的變化。
前處理方法
1.分割肉
準確稱取5 g均勻試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入5 g無水硫酸鈉混勻，再加入15 mL二氯甲烷，用均質器（10000 r/min）均質2 min，4000 r/min離心3 min，將有機相轉移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10 mL二氯甲烷均質提取兩次。離心合并有機相，于40 ℃旋轉蒸發至2 mL，將樣液轉移至5 mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣，加入2 mL環己烷旋渦混勻2 min后，2500 r/min離心3 min，將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質譜/質譜儀測定。
2.腸衣
準確稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入2 g無水硫酸鈉混勻，再加入15 mL二氯甲烷，蓋上蓋混勻，置于超聲波清洗器中超聲30 min，冷卻后將有機相過濾轉移至100 mL梨形蒸餾瓶中，殘渣再用2×10 mL二氯甲烷混勻超聲提取兩次，離心合并有機相，于40 ℃旋轉蒸發至2 mL，將樣液轉移至5 mL刻度試管中，并用少量二氯甲烷洗滌梨形蒸餾瓶，合并洗滌液到刻度試管中，室溫通氮濃縮至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解殘渣，加入2 mL環己烷旋渦混勻2 min后，2500 r/min離心3 min，將下層乙腈相過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質譜/質譜儀測定。
3.蜂蜜
稱取5 g試樣（精確至0.01 g）于50 mL具塞離心管中，加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯，于旋渦混合器上混勻1 min，以3000 r/min離心5 min，將上層乙酸乙酯提取液收集于濃縮瓶中，殘渣再加入20 mL乙酸乙酯，重復上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下減壓濃縮至約3 mL后轉移至10 mL離心管中，用5 mL乙酸乙酯分兩次洗滌濃縮瓶，合并洗滌液于離心管中，用氮氣吹干。加1.0 mL乙腈溶解殘渣，并過0.45 μm微孔濾膜后，供液相色譜-質譜/質譜儀測定。
國標解讀&
注意事項
1.標準物質用甲醇配成100 μg/mL的標準儲備液，在0 ℃～4 ℃冷藏避光保存，可使用3個月。
2.本方法中肉類和腸衣的提取凈化方式為：二氯甲烷提取三次，無水硫酸鈉除水，環己烷除脂；蜂蜜的的提取凈化方式為：水溶解后，乙酸乙酯提取兩次。三種基質均相當于5 g試料上機檢測。
3.根據基質中含水量的多少，調整無水硫酸鈉的用量。
4.本方法采用多次提取的方式提高目標化合物的回收率。
5.本方法使用基質曲線進行定量，還可以使用三種化合物相對應的同位素內標配制標準曲線，進行回收率的校正。
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參考文獻
GB 23200.94-2016 食品安全國家標準 動物源性食品中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量的測定 液相色譜-質譜/質譜法
圖1 分割肉中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
圖2 腸衣中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
圖3 蜂蜜中敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷殘留量測定的前處理流程圖
表1 敵百蟲、敵敵畏與蠅毒磷信息表
文章來源：標準物質中心