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利用高效液相色譜檢測抗菌素—蟲草素的相關案例
蟲草素又被稱為蟲草菌素、蛹蟲草菌素，是第一個從真菌中分離出的核苷類抗菌素。20世紀50年代，野生蛹蟲草在吉林長白山一帶被發現，研究證實其成分功效遠超野生冬蟲夏草，故而命名北冬蟲夏草；1951年，德國科學家等發現蛹蟲草核心成分“蟲草素"，發現其具有多種藥理活性，至今蟲草素在新藥研制、保健等多領域備受關注。
蟲草素的檢測方法以高效液相色譜為主，包括正相、反相、質譜聯用等，還有毛細管電泳法等。微源檢測經查閱文獻分享一種利用高效液相色譜法（HPLC）測定冬蟲夏草中蟲草素含量的檢測方法。
方法選擇合適色譜柱，流動相A為水，流動相B為乙腈，梯度洗脫0～3min，檢測波長260nm，柱溫35℃，進樣量10μL。以保留時間定性，峰面積定量，計算蟲草素含量。精密量取蟲草素對照品4.76mg，置入10mL量瓶，加水適量，使溶解，用水稀釋至刻度，制成濃度為0.476mg／mL的對照品貯備液，取貯備液1.0mL，置入10mL量瓶，加水定容至10mL，得濃度47.6μg／mL的蟲草素對照品溶液。
準確稱取冬蟲夏草1g，用1％乙酸溶液浸泡過夜，37℃超聲提取30min，過濾，收集濾液并用1％乙酸溶液定容至10mL。取2mL，加入乙腈2mL，沉淀蛋白，離心，取上清凍干，加水1mL溶解，0.45lam微孔濾膜濾過得到供試品溶液，待測。
供試品溶液進樣測定，得到色譜峰。對線性關系精密度、重復性穩定性依次進行檢測。以進樣濃度為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，繪制標準曲線，得回歸方程和相關系數得到在范圍內的濃度與峰面積呈良好線性關系，計算蟲草素的峰面積RSD表明實驗的精密度良好穩定性質良好。
準確稱取已知蟲草素含量的冬蟲夏草樣品6份，分別精密加入47.6μg／mL的蟲草素對照品溶液0.5mL，將供試品溶液，按調試好的色譜條件測定，計算回收率。取冬蟲夏草藥材，將供試品溶液，按調試好的色譜條件測定。得到不同產地冬蟲夏草蟲草素的含量。
利用蟲草素的理化性質，方法選用乙腈-水作為流動相系統，梯度洗脫分離蟲草素，可以將蟲草素與雜質進行很好的分離，色譜峰的對稱度和分離度較好，峰形窄且對稱。高效液相色譜技術不斷發展成熟，相關的檢測研究日漸增多。實驗室遵照ISO17025和GMP進行實驗室管理，專注為藥品生產過程中可能產生的雜質提供評估報告、方法開發、驗證及樣品檢測等一系列完整的解決方案。更多檢測問題歡迎私信及評論區留言！
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