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使用前準備：從冷藏箱中取出 BT21 生物指示劑，在室溫下放置一小時，使其恢復至室溫條件。

放置指示劑：將 BT21 安瓿瓶生物指示劑放到一個含有液體的容器內滅菌，或者是裝有液體的相似容器里。這些要滅菌的容器應該型號相同，裝有的液體量相同。

進行滅菌操作：按標準流程進行滅菌。

滅菌后取出：滅菌過程完成后，打開滅菌室的門，等五分鐘然后將生物指示劑從容器中取出。需帶上防護眼鏡和手套，防止可能出現的意外破裂或污染。

培養與結果判定：在 55℃-62℃的環境下培養安瓿瓶，時長不超過 48 小時，每次要用一支沒有滅過菌的同批次生物指示劑，在相同條件下培養作為陽性對照 。每 10 小時觀察一次，如果生長指示培養液的顏色變黃說明這次滅菌過程失敗，如果 48 小時后，指示劑內溶液沒有顏色變化，證明結果呈陰性，即滅菌過程是可接受的，同時陽性對照的生物指示劑應顯示黃色 。