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（1）在肉膏蛋白胨斜面試管上，用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。
（2）點燃酒精燈或煤氣燈。
（3）將菌種試管和待接種的斜面試管，用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中，并將中指夾在兩試管之間，使斜面向上，成水平狀態，如圖Ⅶ-7。在火焰邊用右手松動試管塞，以利于接種時拔出。
（4）右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，并迅速燒灼管口。
（5）將滅菌的接種環伸入菌種試管內，先將環接觸試管內壁或未長菌的培養基，達到冷卻的目的，然后再挑取少許菌苔。將接種環退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜面試管，用環在斜面上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養基劃破，也不要使環接觸管壁或管口。
（6）接種環退出斜面試管，再用火焰燒管口，并在火焰邊將試管塞塞上。將接種環逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環上沾的菌體較多時，應先將環在火焰邊烤干，然后燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出污染環境，接種病原菌時更要注意此點。