大鼠結腸黏膜上皮原代細胞

培養信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠結腸黏膜上皮細胞分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細胞是機體內外環境的重要屏障，持續暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應的起始階段發揮關鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發生、性質和強度。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠結腸黏膜上皮細胞采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠結腸黏膜上皮細胞經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養法

　　③ 懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

ACVRL1 Others Mouse 小鼠 ALK-1 人細胞裂解液   HuH-6(人肝母細胞瘤細胞)     MET Others Human 人 c-MET / HGFR 人細胞裂解液   SHZ-88(大鼠癌細胞)   ACHN 人腎細胞腺癌細胞 豬原代肺微血管內皮細胞 小鼠原代頸動脈內皮細胞

Insulin protein (from porcine pancreas 0.5mgInsulin protein (from porcine pancreas) 豬胰島素

IL18 Protein Human 重組人 IL18 / Interleukin 18 / IGIF 蛋白 (GST 標簽)

ACE2重組食蟹猴 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 Protein

IL36B Protein Mouse 重組小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白

TLK1重組人 TLK1 / PKU-beta 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

小鼠內臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑(vaspin)ELISA 試劑盒

Rat basic fibroblast growth factor 4 (bFGF-4) ELISA Kit 大鼠堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)試劑盒

HumanCytotoxin-associatedprotein,CagAELISAKit 人細胞毒素相關蛋白A(CagA)試劑盒 進口分裝

Human6-keto-prostaglandinF1a,6-K-PGF1a試劑盒人6同前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒

正常大鼠(SpragueDawley)腸組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升

MouseAi-myocardialaibody,AMAELISAKit小鼠抗心肌抗體(AMA)試劑盒

整合素α2β1   英文名稱：   Iegrin α2β1   規格：      英文縮寫：   Iegrin α2β1

整合素α5β3   英文名稱：   Iegrin α5β3   規格：      英文縮寫：   Iegrin α5β3

β-整合素   英文名稱：   β-Iegrin   規格：      英文縮寫：   β-Iegrin

誘導型合酶   英文名稱：   induced niic oxide syhas   規格：      英文縮寫：   iNOS

大鼠結腸黏膜上皮原代細胞植物過氧化物酶(POD)試劑盒

Human ai ribosomal P protein aibody (ARPA/Rib-P) ELISA Kit 人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)試劑盒

PorcineapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 豬載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAECA(Mouseai-endothelialcellaibody)ELISAKit小鼠抗內皮細胞抗體

血液氧化型(GSSG)濃度高效液相色譜定量試劑盒50次

MouseSomalcellderivedfactor1β,SDF-1βELISAKit小鼠基質細胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)試劑盒

IL13RA1重組大鼠 IL13RA1 蛋白  Protein

Ghrelin 28 腦腸肽28 0.5mgGhrelin 28 腦腸肽28

FCGR2B重組人 CD32b / FCGR2B 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated Protein

AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白 (His 標簽)

CXADR Protein Mouse 重組小鼠 CXADR 蛋白 (His 標簽)

客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。(該細胞傳代次數有限約 2 代，建議客戶收到細胞后盡快安排后續實驗)

1、取出細胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 培養箱中靜置 6-8 小時，以穩定細胞狀態。

2、待細胞達到 80%匯合時準備進行傳代培養。

3、細胞傳代：

1)吸出細胞瓶中的培養基，用 PBS 清洗細胞一次。

2)加入 0.125%消化液約 1mL 至培養瓶中，37℃消化 3min 左右；顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入培養液終止消化。

3)用吸管輕輕吹打混勻，按 1:2 或 1:3 等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的培養基至 5mL，放入 37℃ 5% CO2 細胞培養箱中培養。

4)待細胞貼壁后，培養觀察，每隔 2-3 天更換新鮮的培養基。