商品介紹:
Dovitinib(CHIR-258;TKI258)lactate是高效的成纖維細胞生長因子受體3(FGFR3)抑制劑,IC50值為5nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:692737-80-7 別名:CHIR-258 lactate;TKI-258 lactate 純度:99.77% 分子量:482.51 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
異配囊接霉人上皮膜抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)
腸桿菌屬人凝聚Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內(nèi)皮抗體(AECA)
植物乳桿菌植物亞種人OJ抗體/抗異亮酰tRNA合成抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內(nèi)皮抗體(AECA)
廣島鏈霉菌人抗著絲點抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α羥基丁脫氫(αHBDH)
季也蒙假絲酵母人肌生成Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α羥基丁脫氫(αHBDH)
梨形卷枝霉人A組鏈球菌菌壁多糖抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)
云芝栓孔菌(變色栓菌)人活化蛋白C抵抗Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠全段甲狀旁腺(i-PTH)
釀酒酵母人N端外顯肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠中性粒彈性蛋白(NE)
釀酒酵母人分泌成分Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠中性粒彈性蛋白(NE)
毛頭鬼傘人二磷腺苷Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠牛小腸堿性磷(CIAP)
蠟狀芽孢桿菌人蛋白聚糖Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠牛小腸堿性磷(CIAP)
解淀粉芽孢桿菌人吡啶Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)
根瘤菌人5羥基乙Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)
黃海海桿狀菌人12羥二十烷四烯Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β基己糖苷A(β-Hex A)
消化乳桿菌人羥脯Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β基己糖苷A(β-Hex A)
釀酒酵母人一氧化氮Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)
γ-基丁A受體相關(guān)膜蛋白3大斑凸臍蠕孢(斜面)人男性正常龜頭細胞
鋅指蛋白288抗體向日葵莖潰瘍病菌小鼠胚胎成纖維細胞(干細胞庫保藏)
鋅指蛋白ZBTB38抗體冬菇羅猴胎腎細胞
鋅指蛋白693抗體石榴嗜藍孢孔菌二氫葉還原缺陷型中國倉鼠卵巢細胞
FGFR3抑制劑(Dovitinib lactate)鹽帽黃桿 光萼野百合堿
羅漢果黃
黑曲霉 羅漢果皂苷IIIe
青霉屬 溴藍
木糖氧化纖維反硝化亞種 百里藍鈉
俄勒岡靈芝 益母草苷
薄層屬 乙酸龍腦酯
黃產(chǎn)色鏈霉 α-亞麻酸
膠孢 百里藍
暗孢節(jié)菱孢 亞油酸
明尼蘇達被毛孢 靛藍胭脂紅
釀酒酵母 靛藍
芥黃蜜環(huán) 蓖麻酸
短桿屬 化硝基四氮唑藍
細黃鏈霉 4-甲氧基