詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
ON123300 | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
ON123300是一種有效的CDK4抑制劑,IC50為3.8nM,對CDKs1,2,5和8的抑制劑作用很低。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1357470-29-1 純度:98.29% 分子量:429.52 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
枯草芽孢桿菌人吖啶橙Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過氧化物(MPO)
柔嫩艾耳球蟲人喋呤Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠顆粒B(Gzms-B)
中國臺灣根霉人對基甲Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠顆粒B(Gzms-B)
亞灰光柄菇人Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)
炭疽病人免疫核糖核Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)
鏈格孢人β萘Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠顆粒A(Gzms-A)
多色節桿菌人β內酰抑制劑Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠顆粒A(Gzms-A)
短芽孢桿菌人α半乳糖基抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)
小孢綠杯菌人αN已酰基葡糖苷Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠淋巴趨化因子(Lptn/LTN/XCL1)
黑曲霉人α2纖溶抑制物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)
果生鏈核盤菌人高香草Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)
南擬酵母人煙酰腺二核苷磷Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)
海海桿狀菌人鈣粘蛋白相關的神經受體1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)
釀酒酵母人毛細血管擴張性共濟失調突變基因Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)
宛氏擬青霉人芳香烴受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)
釀酒酵母人特異性巨噬武裝因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠補體蛋白4(C4)
鋅指蛋白804A抗體落葉松木層孔菌大長舌果蝠肌肉細胞
負調控因子白細胞介2抗體青柄多孔菌大鼠肌肉成纖維樣細胞
鋅指蛋白BED3抗體鬼傘盤羊皮膚細胞
鋅指蛋白379抗體短芽孢桿菌樹鼩肺成纖維樣細胞
CDK4抑制劑(ON123300)萬壽菊鏈格孢 去乙?;鵒phiopojaponin A
矩圓黑盤孢 百里
釀酒酵母 元-3-O-β-D-木糖-(1→3) -β-D-葡萄糖苷
聚貪噬 甲基百里藍
深海微桿 3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-葡萄糖麥冬苷元
毛頭鬼傘,雞腿菇 二甲苯藍
短柄帚霉 二甲苯青FF
食砜節桿 澤瀉A
嗜酸乳桿 麥冬皂苷D'
無恒變形 Ophiopojaponin C
馬賽 (+)松脂-β-D-吡喃葡萄糖苷
釀酒酵母 曲苯藍
蠟樣芽孢桿 澤瀉A-24-醋酸酯
圍小叢殼 噻唑藍
異常畢赤酵母 考馬斯亮藍R250