詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PU-WS13 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PU-WS13是一種有效的,Grp94特異性的Hsp90抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1454619-14-7 純度:98.06% 分子量:411.35 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
色褐鏈霉菌人甘露糖受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
梭菌人未甲基化寡聚脫氧核苷Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)
Enterobacter 人甲酰甲硫Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)
枯草芽胞桿菌人ICE蛋白激活因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游離脂肪(FFA)
普通變形桿菌*人甲基化寡核苷Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠游離脂肪(FFA)
不等彎孢人蛋白ZBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)
大腸埃希氏菌人蛋白SBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)
短小芽孢桿菌人可溶性血管內皮蛋白C受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠骨粘連蛋白(ON)
污黑腐皮殼人CCAAT增強子結合蛋白εBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠骨粘連蛋白(ON)
地衣芽孢桿菌人CCAAT增強子結合蛋白δBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠葉(FA)
球孢白僵菌人CCAAT增強子結合蛋白αBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠葉(FA)
檸檬色節桿菌人2,3-二磷甘油Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)
平滑假絲酵母人基膜聚糖/內腔蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)
釀酒酵母人Na+/H+交換體3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)
納什維爾鏈霉菌人孤腓肽Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)
雜色曲霉人基質裂解Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠糖皮質類固受體(GR)
鋅指蛋白211抗體亮陀螺炭球菌小鼠誘導性多潛能干細胞
鋅指蛋白ZBTB3抗體亮褐裸傘豬靜脈血管內皮細胞
鋅指蛋白437抗體絨粘蓋牛肝菌人慢性髓系白血病細胞(白介21基因修飾)
鋅指蛋白415抗體褐革菌人慢性髓系白血病細胞(白介15基因修飾)
Hsp90抑制劑(PU-WS13)微小桿屬 9’’’-丹酸B單甲酯
纖維單胞屬 溴甲綠鈉
蠟狀芽孢桿 9’-丹酸B單甲酯
耐久腸球 溴甲綠
西班牙糖絲 大豆皂苷Ab
泡盛曲霉 固綠FCF
枯草芽胞桿 丹酸B二甲酯
空泡單胞 萘綠B
球孢白僵 25-甲氧基澤瀉A
長枝木霉 菜油甾
釀酒酵母 亮綠SF(淡黃)
大腸埃希 24-乙酰澤瀉F
多主葡萄殼 亮綠
貪噬 燦爛甲藍
貝氏不動桿 澤瀉B