化工儀器網
詳細介紹
產品屬性：
中文名稱：Caspase-3活性測定試劑盒
英文名稱：Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit
產品規格：20T|50T|100T
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
商品介紹：
本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-3活性。測定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA)，釋放硝基pNA。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰，用普通可見光分光光度比色方法測定。根據pNA標準管吸光度OD值和標準曲線，計算來自底物肽釋放的pNA濃度，得到Caspase-3水解活性。 Caspase-3是凋亡過程中主要的終末剪切酶，因而也是研究多的caspase，它激活pro-caspase-2,6,7,9等，特異水解多種凋亡關鍵蛋白如PARP，介導細胞核染色質固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。 運輸及保存：試劑常溫運輸。到達后按要求儲存，1年內穩定。 所需儀器：酶標儀與96孔酶標板；或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。 工作波長：大吸收波長405nm，如不具備也可在400～450nm范圍內測定，但靈敏度略降。 |
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
磺二嘧啶 （標準品）英文名稱： Oseltamivir phosphate 凝集蛋白家族11抗體包裝1g
磺二氧基嘧啶(標準品)英文名稱： Oseltamivir phosphate 銅代謝結構域蛋白1抗體包裝5g
磺惡唑（標準品）英文名稱： Dibucaine HCl20號染色體開放閱讀框96抗體包裝25g
磺基嘧啶(標準品)英文名稱： Donepezil 3號染色體開放閱讀框26抗體包裝5g
磺氧噠(標準品)英文名稱： Doripenem 粘附分子2抗體包裝25g
磺間二氧嘧啶鈉(標準品)英文名稱： Doripenem 耳聾-狀腺腫綜合征相關COBL蛋白抗體包裝5g
磺間氧嘧啶(標準品)英文名稱： Doxapram Hydrochloride20號染色體開放閱讀框195抗體包裝1g
磺脒（標準品）英文名稱： Doxapram Hydrochloride7號染色體開放閱讀框62抗體包裝1g
磺嘧啶（標準品）英文名稱： Doxylamine succinate9號染色體開放閱讀框174抗體包裝1g
磺嘧啶鈉(標準品)英文名稱： Doxylamine succinate6號染色體開放閱讀框64抗體包裝25g
磺嘧啶銀(標準品)英文名稱： Drospirenone免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ抗體包裝5g
磺噻唑(標準品)英文名稱： Drospirenone透明質介導游走受體抗體包裝1g
磺異噁唑(標準品)英文名稱： Ethiny Estradiol周期樣Y1抗體包裝5g
磺芐西林（標準品）英文名稱： Ethiny Estradiol周期J抗體包裝100ml
磺草靈(標準品)英文名稱： Ethionamide周期L抗體包裝25g
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質量規格：>98%,BR心肌肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒吳茱萸內酯;Evodine
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質量規格：>98%,BP協同激分子受體試劑盒五味子;Schisandrin C
鏈狀假絲酵母Candida│catenulata 質量規格：HPLC>98%,標準品小而密低密度脂蛋白試劑盒五味子乙;schisandrol B
Caspase-3活性測定試劑盒虎皮粘蓋牛肝 2-氨基-3-甲基-5-氯吡啶產幽門螺桿抗體IGGElisa
枯草芽孢桿 乙酰酮化鈰(III) 水合物二酰Elisa
松針散斑殼 醋酸氯己定琥珀酰Elisa
枯草芽孢桿 4-氟-2-(三氟甲基)溴芐傷寒IgM抗體Elisa
大腸埃希氏 異丁酸香蘭酯跨膜蛋白97Elisa
嚙蝕艾肯氏 5-溴-2-間二甲苯絲酸酮酸氨基轉移Elisa
星孢鏈霉 2,5-二氯肉桂酸胖Elisa
大腸埃希氏桿 4-甲基噻唑-5-甲酸乙酯;4-甲基-5-乙氧羰基噻唑脂肪因子Elisa
凝結芽孢桿 D-焦谷氨酸叔丁酯1,3-Elisa
蘇云金芽孢桿 1-Boc-2-羥甲基哌1,2-Elisa
枯草芽孢桿 5-氯苯并噻吩核糖核酸LElisa
產氨棒桿 1-溴-4-異丁基苯甲血清白蛋白結合物Elisa
釀酒酵母 3-苯甲酰酸內皮受體AElisa
紅球 D-葡糖酸-gamma-內酯酮內皮受體BElisa
挪威假絲酵母 4-異基芐氯Tafazzin蛋白Elisa
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
化工儀器網