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詳細介紹
商品介紹：
PF-543Citrate是新穎的可滲透細胞的SPHK1抑制劑，Ki值為4.3nM。對SPHK1的選擇性是SPHK2的100倍以上。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1415562-83-2 純度：98.22% 分子量：657.73 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
產品屬性：
英文名稱：PF-543 Citrate
產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
櫟小皮傘大鼠肉堿脂酰轉移Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調結合蛋白(CALD)
大腸埃希氏桿菌兔子補體片斷3aAnti-NECTIN1 Antibody人鈣調結合蛋白(CALD)
枯草芽孢桿菌小鼠溶菌Anti-NEDD1 Antibody人鈣調磷(CaN)
鍋孢霉人CD14分子Anti-NECTIN3 Antibody人鈣調磷(CaN)
栗酒裂殖酵母人凋亡誘導因子Anti-NECTIN3 Antibody人骨退化特異標志物(CTX-2)
耐輻射奇球菌兔子基質金屬蛋白3Anti-NEFH Antibody人骨退化特異標志物(CTX-2)
白僵菌大鼠磷化乙酰羧化Anti-NEFH Antibody人鈣結合蛋白(CR)
釀酒酵母小鼠可溶性CD30Anti-NEFL Antibody人鈣結合蛋白(CR)
臭曲霉兔磷TRAP-5b Anti-NEDD4 Antibody 人骨形成蛋白6(BMP-6)
冠突曲霉人白共同抗原Anti-NEFL Antibody人骨形成蛋白6(BMP-6)
冷桿菌兔子可溶性CD40配體Anti-NEFM Antibody人脂肪結合蛋白(FABP)
聚生殼菌小鼠可溶性肌球蛋白重鏈Anti-NEIL3 Antibody人脂肪結合蛋白(FABP)
海洋桿菌大鼠金屬硫蛋白Anti-NEGR1 Antibody人腺苷三磷結合盒轉運體A1(ABCA1)
膜醭畢赤酵母大鼠心肌特異性肌鈣蛋白TAnti-NEIL3 Antibody人腺苷三磷結合盒轉運體A1(ABCA1)
化妝品 霉、甲硝唑小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1Anti-NEFM Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)
釀酒酵母兔主要組織相容性復合體Ⅰ類Anti-NEK2 Antibody人羥脯糖蛋白(HRGP)
胰島β細胞生長因子抗體邊莢魚藤根瘤菌人涎腺腺樣囊性癌細胞
環指蛋白149抗體假地豆根瘤菌人T淋巴細胞白血病細胞
心臟蛋白磷1結合蛋白/環指蛋白158抗體波葉山螞蟥根瘤菌人胎盤絨毛癌細胞
環指蛋白180抗體本氏木蘭根瘤菌人急性淋巴母細胞白血病細胞
SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate)紫紅牛肝 9-Hydroxycalahone
天藍色鏈霉 銅
釀酒酵母 檸檬酸銅
糞腸球 雙環己酮草酰二腙
枯斑擬盤多毛孢 羥溶液
無色桿 硫酸鈰
蒼白彎孢 鉑酸
根瘤 聚乙烯磷酸
新月彎孢 芐基三乙基化
銅綠假單胞
酵母屬 吡咯烷二硫代甲酸鹽
紫色紅曲 甲酸
三聚速測 草酸高鐵
鏈格孢 五酸
德氏乳桿乳酸亞種 鎢酸
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