商品介紹:
GSK503是高效特異性的EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑,Kiapp值為3到27nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1346572-63-1 純度:99.29% 分子量:526.67 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
嗜中溫居冰菌磷化絲/蘇蛋白激39抗體Anti-FGF8 Antibody血管內(nèi)皮蛋白C受體(PROCR)
枯草芽孢桿菌磷化轉(zhuǎn)錄生長因子SP1抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內(nèi)皮生長因子受體3(VEGFR3)
Pseudomonas oryzihabitans分選連接蛋白4抗體Anti-FGF8 Antibody血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR2)
菜豆間座殼分選連接蛋白9抗體Anti-FGF9 Antibody血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR1)
克魯斯假絲酵母分選連接蛋白10抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內(nèi)皮生長因子D(VEGFD)
灰色鏈霉菌銹色變種分選連接蛋白11抗體Anti-FGFR1 Antibody血管內(nèi)皮生長因子C(VEGFC)
地衣芽孢桿菌分選連接蛋白6抗體Anti-FGFR2 Antibody血管內(nèi)皮生長因子B(VEGFB)
威特弗拉里亞鞘盒菌生成相關(guān)蛋白3抗體Anti-FGR Antibody血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)
馬德里毛殼磷化非受體酪激c-Abl抗體Anti-FGG Antibody血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)
花生根瘤菌SRC有絲分裂相關(guān)蛋白68抗體Anti-FGFR4 Antibody血管內(nèi)皮生長因子145(VEGF145)
肉質(zhì)鏈霉菌SH3BGRL2蛋白抗體Anti-FH Antibody血管內(nèi)皮鈣黏蛋白(CDH5)
戈登氏菌(加詞待譯)鈉離子通道相關(guān)蛋白1抗體Anti-FHIT Antibody血管緊張Ⅲ(AngⅢ)
食石油類諾卡氏菌SH3結(jié)構(gòu)域激結(jié)合蛋白1抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體2(AGTR2)
桃中田殼小圓孢菌Src家族相關(guān)磷化蛋白2抗體Anti-FHL1 Antibody血管緊張Ⅱ受體1(AGTR1)
釀酒酵母SLAP2抗體Anti-FHL3 Antibody血管緊張Ⅰ(AngⅠ)
布氏假單胞菌淋巴胞漿蛋白2抗體Anti-Fibronectin(FN1) Antibody血管緊張1-9(Ang1-9)
鈣周期結(jié)合蛋白抗體解酯假絲酵母解酯變種THP-1人急性白血病單核巨噬細胞株
葡萄糖-6磷轉(zhuǎn)運蛋白抗體綠曲霉C2C12小鼠成肌細胞系
SNAPC3蛋白抗體褐單梗曲霉CHL倉鼠肺細胞
泛相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白5抗體間型脈孢菌CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細胞
EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(GSK503)大腸埃希氏 結(jié)晶紫增液布魯氏桿病Elisa
米曲霉 O/F培養(yǎng)基(HLGB)弓形蟲Elisa
酮丁梭 胰胨大豆瓊脂斜面(TSA)CD36分子Elisa
礦工擬諾卡氏 42℃生長培養(yǎng)基流感病H3N2亞型Elisa
里氏木霉 /L蛋白胨肉湯肌球蛋白重鏈IElisa
長柄鏈格孢 三糖鐵肌球蛋白重鏈IIaElisa
熒光威克酵母 我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)肌球蛋白重鏈IIxElisa
金黑小單孢 慶大霉瓊脂肌球蛋白重鏈IbElisa
節(jié)桿 多粘B(2.5萬單位)λ干擾Elisa
馬丁枝孢 多粘B肉湯基礎(chǔ)(SCPB)腺苷酸環(huán)化Elisa
禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病 TCBS瓊脂Elisa
大腸埃希氏O157 堿性蛋白胨水圓環(huán)病2型抗原Elisa
枯草芽孢桿 甲苯藍-DNA瓊脂甲型流感病Elisa
蠟狀芽孢桿 葡萄球增肉湯抑絲蛋白2Elisa
香菇 亞碲酸鹽肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)半胱氨酸蛋白抑制劑3;胱抑Elisa