詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
PHT-427 | 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg | 1~3天 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PHT-427是一種Akt和PDPK1雙重抑制劑,與Akt和PDPK1中的PH結構域有親和性,Ki分別為2.7μM和5.2μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:1191951-57-1 純度:98.24% 分子量:409.61 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
新城疫病人可溶性腫瘤壞死因子α受體Anti-NCBP2 Antibody人葡萄球菌蛋白A(SPA)
橄欖色盾殼霉大鼠促性腺激釋放激受體Anti-NCK2 Antibody人葡萄球菌蛋白A(SPA)
沃氏葡萄球菌大鼠磷化腺苷活化蛋白激Anti-NCOA4 Antibody人刀豆A(ConA)
泡囊短波單胞菌兔超敏C反應蛋白Anti-NCOA3 Antibody人刀豆A(ConA)
構巢曲霉植物維生DAnti-NCLN Antibody人游離原卟啉(FEP)
熱帶假絲酵母小鼠腦源性神經營養因子Anti-NCF4 Antibody人游離原卟啉(FEP)
白色念珠菌人可溶性因子受體Anti-NCK2 Antibody人脂多糖結合蛋白(LBP)
木賊鐮刀菌人可溶性凋亡相關因子配體Anti-NCoR1 Antibody人脂多糖結合蛋白(LBP)
板栗蛇孢日規殼植物維生B6Anti-NCOA5 Antibody人過氧化(GSH-Px)
深紅正青霉兔基質金屬蛋白1Anti-NCOA7 Antibody人過氧化(GSH-Px)
球孢白僵菌小鼠骨成型蛋白2Anti-NCR2 Antibody人(GSH)
釀酒酵母大鼠熱休克蛋白47Anti-NDC80 Antibody人(GSH)
釀酒酵母人凋亡抑制因子Anti-NCS1 Antibody人17-類固(17-KS)
葡萄座腔菌小鼠骨成型蛋白4Anti-NDUFA4 Antibody人17-類固(17-KS)
栗色渾圓鏈霉菌植物25羥基維生D3Anti-NDUFA4 Antibody人17羥皮質類固(17-OHCS)
離中不粘柄菌兔8-異構前列腺Anti-NDUFA3 Antibody人17羥皮質類固(17-OHCS)
視黃脫氫13抗體蘇云金芽孢桿菌東北亞種人子宮鱗癌細胞(高分化)
環指蛋白160抗體蘇云金芽孢桿菌九州亞種TNFa轉染耐VP16絨癌細胞
E3泛蛋白連接144A抗體蘇云金芽孢桿達姆斯塔特亞種人腎透明細胞腺癌細胞
RGAG4蛋白抗體丁香假單胞菌丁香致病變種人甲狀腺癌細胞KHM-5M(干細胞庫保藏)
Akt和PDPK1雙重抑制劑(PHT-427)盲腸腸球 Eriodictyol 7-O-glucoside
薄花邊傘7-5 Eichlerialactone
單胞 疏展香茶菜寧 A
費氏中華根瘤 槐亭
約氏乳桿 Dihydropinosylvin methyl ether
放線多孢 Dihydroalpinumisoflavone
暗點雙座炭殼 赤芝酮
氏富鹽 地黃苷
冬蟲夏草 Methyl β-D-fructofuranoside
黑附球 三裂尾草(供應商少)
匍匐曲霉 甲基異石榴皮堿
竹喙球 丹寧
蠟樣芽胞桿 (蠟狀芽胞桿) 松馳D
宇佐曲霉 柳杉二
放線 Confluentic acid