以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PAK小分子抑制劑(FRAX1036) | FRAX1036 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
FRAX1036是新型ATP競爭性的PAK小分子抑制劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1432908-05-8 純度:98.0% 分子量:518.05 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
Bacillus safensis Satomi et al. 粘附分子整合β1抗原Anti-CST2 Antibody人干因子受體(SCFR)
啤酒酵母粘附分子整合α5抗原Anti-CST9L Antibody人干因子受體(SCFR)
球孢白僵菌整合αV抗原Anti-CSTF1 Antibody人干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
金針菇8號蛋白質酪激JAK-1抗原Anti-CST8 Antibody人干因子/肥大生長因子(SCF/MGF)
麥克默多生孢八疊球菌蛋白質酪激JAK-2抗原Anti-CSTF2 Antibody人可溶性CD40配體(sCD40L)
樟疫霉磷化蛋白酪激JAK-2抗原Anti-CSTF2T Antibody人可溶性CD40配體(sCD40L)
粘質沙雷氏菌c-Jun基末端激1/3多肽抗原Anti-CSTF2T Antibody人可溶性CD30配體(sCD30L)
柳屬半明小黑腐皮殼菌磷化基末端激1/2/3(pJNK1/2/3)抗原Anti-CTCF Antibody人可溶性CD30配體(sCD30L)
大腸埃希菌Ki-67 AntigenAnti-CSTL1 Antibody人正常T表達和分泌因子(RANTES/CCL5)
釀酒酵母腸道內富含的Kruppel樣因子抗原Anti-CTCFL Antibody人正常T表達和分泌因子(RANTES/CCL5)
小孢毛霉磷化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗原Anti-CSTL1 Antibody人P選擇(P-Selectin/CD62P/GMP140)
大腸埃希氏菌磷化腸道內富含的Kruppel樣因子5抗原Anti-CTDSP1 Antibody人P選擇(P-Selectin/CD62P/GMP140)
柑橘葡萄座腔菌乳脫氫抗原Anti-CTPS1 Antibody人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)
委內瑞鏈霉菌瘦受體Anti-CTPS1 Antibody人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)
香菇脂蛋白磷脂A2抗原Anti-CTSB Antibody人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)
根瘤菌腸上皮干蛋白(多肽)Anti-CTLA4 Antibody人血血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)
凋亡相關蛋白6抗體冬蟲夏草人乳腺癌細胞(黑瘤細胞)
凋亡相關蛋白7抗體蟲草人宮頸上皮永生化細胞
調亡誘導因子家族蛋白PEF1抗體臥孔菌人肺腺癌順鉑耐藥性細胞
性核磷蛋白32家族B抗體蜜粘褶菌=革裥菌人骨髓間充質干細胞
PAK小分子抑制劑(FRAX1036)弓形蟲(GTS-3株) Vibsanin C
副溶血弧 Venoterpine
玫紅假裸囊 Vasicinolone
森青霉 三萜酸 A
淺黃灰漫游孢囊 Trilobatin 2''-acetate
Neofusicoccum australe Trichokaurin
根瘤 Tetrahydrolachnophyllum lactone
芽孢桿屬 Tetrachyrin
火神地芽孢桿 繡線菊堿 F
匍匐曲霉原變種 Spegatrine
殼 Sequosempervirin B
柱狀環(huán)傘(柳菇、茶新菇) Sanggenol A
短小芽孢桿 Prionitin
釀酒酵母 Palbinone
枯草芽孢桿 Paeonilactone B