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詳細介紹
商品介紹：
熒光染料Hoechst33342 能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst33342 比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 的結構發生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33342 排出到細胞外使之在細胞內積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。而PI 染料是不能進入細胞膜完整的正常細胞和凋亡細胞中，即活細胞對PI 染料拒染，而壞死細胞由于膜完整性在早期即已破損，可被PI 染料染色。 用Hoechst33342 結合PI 染料對凋亡細胞進行雙染色，就可在流式細胞儀上將正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞區別開來。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，這三群細胞表現分別為：正常細胞為低藍色/低紅色（Hoechst33342+/PI+），凋亡細胞為高藍色/低紅色（Hoechst33342++/PI+），壞死細胞為低藍色/高紅色（Hoechst33342+/PI++） 儲存：2-8℃，避光，有效期一年。 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit | 100T | 1～3天 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
楤木皂苷A英文名稱： Amikacin成纖維生長因子受體2抗體包裝1g
粗葉懸鉤子甙英文名稱： Aminophyllin hydrate成纖維生長因子受體4抗體包裝5g
醋辛酯（標準品）英文名稱： Ammonium bismuth citrate, hydrate凝血原(纖維介)抗體包裝1g
大波斯菊苷,芹菜-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（標準...英文名稱： Ammonium bromide衰老關鍵蛋白抗體包裝25ml
大車前苷(標準品)英文名稱： Ammonium iodide凋亡調節基因之一抗體包裝5ml
大豆苷,黃豆苷 （標準品）英文名稱： Ammonium iron(II) sulfate, hexahydrate凋亡調節基因之一抗體（短型）包裝25ml
大豆,黃豆苷元(標準品）英文名稱： Ammonium molybdate, tetrahydrate纖維連接蛋白抗體包裝5ml
大風子（標準品）英文名稱： Ammonium phosphomolybdate , hydrateFosB蛋白抗體包裝250mg
大腹皮（標準品）英文名稱： Ammonium sodium phosphateFRA2/FOSL2抗體包裝1g
大果木姜子（標準品）英文名稱： Ammonium succinate叉頭蛋白P3抗體包裝5g
大紅袍（標準品）英文名稱： Ammonium thiosulfate成纖維生長因子8抗體包裝50mg
大黃(掌葉大黃)（標準品）英文名稱： Amprolium hydrochloride肌動蛋白結合蛋白Fascin抗體包裝25g
大黃（藥用大黃）（標準品）英文名稱： Antimony (III) oxide線粒體裂變1蛋白抗體包裝5g
大黃酚(標準品)英文名稱： Azomethine-H monosodium salt叉頭蛋白P1抗體包裝25g
大黃酚-8-O-葡萄糖苷（標準品）英文名稱： Azure C鼠疫F1蛋白/鼠疫耶爾森氏菌莢膜抗原F1單克抗體包裝5g
束梗鏈格孢(犁黑斑病菌)Alternaria│bokurai 質量規格：進口原裝Santa,99%腎試劑盒去基川陳皮;Demethylnobi
黃孢原毛平革菌Phanerochaete│chrysosporium 質量規格：含量98.0%~100.5%神經軸突絲蛋白試劑盒芹菜-7-O-β-D-葡萄糖苷;Api
#擬雙輪絲鏈輪絲菌Streptoverticillium│biverticillatopsis Yan et al. 質量規格：>99%神經元凋亡抑制蛋白試劑盒芹菜-7-O-葡萄糖苷;Apige
Hoechst 33342/PI雙染試劑盒慢生根瘤 異丁酸異戊酯泛激活E1Elisa
食酸戴爾福特* 4-氯-2,5-二氟苯甲泛激活E2Elisa
多殺性巴氏桿 2-甲基丁酸異丁酯甲型流感病Elisa
褐球固氮 2,3,4,5,6-五溴甲苯窖蛋白Caveolin2Elisa
節桿屬 (甲硫基）乙酸窖蛋白Caveolin3Elisa
滕倉赤霉 1-十二烷基-3-甲基咪唑四氟酸鹽I因子補體片段3bElisa
大腸埃希分泌磷酸蛋白1Elisa
山綠豆根瘤 3,5-二氟-4-維甲酸受體Elisa
*正紅菇 2-(2'-羥基-5'-基)苯并三唑70kDa熱休克蛋白8Elisa
拜耳接合酵母 2,3-二氟-4-氯苯百日咳桿Elisa
釀酒酵母 2,3-二溴-5-氟吡啶胰島受體αElisa
傘枝犁頭霉 2-溴-4,5-二氟甲酯抗卵透明帶抗體Elisa
枯草芽孢桿* 1,5,6,8-四氫吡喃并[4',3':4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮抗腎上腺皮質抗體Elisa
長柄鏈格孢 多拉司瓊甲磺酸鹽一水合物全段甲狀旁腺Elisa
鮮綠青霉 N-甲基辛炭疽桿IgM抗體Elisa
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