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過碘酸雪夫反應(PAS)——顯示細胞內糖原資料說明
閱讀:2750 發布時間:2017-3-14提 供 商 | 上海谷研實業有限公司 | 資料大小 | 7.9KB |
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資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數 | 2750次 |
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(一)原理
組織、細胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來顯示,其化學基礎是利用過碘酸的氧化作用,打開碳鏈形成醛,生成的醛基與Schiff試劑中的無色品紅反應形成紫紅色化合物。
(二)方法
l.取l~2mm厚的肝組織塊,用Carnoy氏液4℃固定4~6小時。
2.乙醇脫水、二甲苯透明。石蠟包埋,切片。
3.用70%乙醇展片。
4.脫蠟:二甲苯(1)5分鐘→二甲苯(2)5分鐘→100%乙醇5分鐘→含1%火棉膠的乙醇液1分鐘→70%乙醇1分鐘。
5.直接浸入過碘酸酒精液反應5~15分鐘,經70%乙醇洗片刻。
6.浸入Schiff氏酒精液反應15分鐘。
7.亞硫酸水洗三次,以洗去多余的非特異性結合的色素,以及擴散的染料。
8.流水沖洗3~5分鐘。
9.蒸餾水洗。
10.浸入Ehrlich蘇木精復染20~30秒,使細胞核著色。
11.脫水:95%乙醇3分鐘二次→100%乙醇3分鐘二次→二甲苯透明10分鐘二次。
12.加蓋片鏡檢或樹膠封固后鏡檢。
(三)結果
細胞中呈紫紅的顆粒即為糖原。