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ACT-1 (人甲狀腺癌細胞)培養步驟

閱讀:146          發布時間:2024-6-26

ACT-1 (人甲狀腺癌細胞)培養步驟:

一.培養基及培養凍存條件準備:

           1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。

           2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

           3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。

二.細胞處理:

           1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入

           37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移

           入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合

           均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,

           加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入

           含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液

           并檢查細胞密度。2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,

           即可進行傳代培養。對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

           方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。


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