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上海谷研實業有限公司>技術文章>植物激素脫落酸ELISA試劑盒實驗操作步驟

技術文章

植物激素脫落酸ELISA試劑盒實驗操作步驟

閱讀:329          發布時間:2019-3-21

       實驗開始前,各ELISA試劑盒均應平衡至室溫,試劑不能直接在37 溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液 100 ,余孔分別加標準品或待測樣品100 ,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37 溫育2小時。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100 (臨用前配制),酶標板加上覆膜,37 溫育1小時。

3.棄去孔內液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400 /每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。

4.每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100 ,加上覆膜,37 溫育1小時。

5.棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液90 ,酶標板加上覆膜37 避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。
7.每孔加終止溶液50 ,終止反應,此時藍色立轉黃色,終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。 

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(值)。

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