化工儀器網
詳細介紹
RPMI-1640 培養基
| 英文名稱 | RPMI-1640 |
| 規格 | 500ml |
| 貨號 | GOY-XP3091 |
RPMI 1640培養液是由Moor等研究成功的，最初為培養小鼠白血病細胞的需要而準備。開始的配方特別適合懸浮細胞的生長，主要針對淋巴細胞，后經多次改良從RPMI 1630、1634，而至RPMI 1640。其組成較為簡單，但可以適應很多種類細胞的生長。不僅腫瘤細胞，而且很多正常組織細胞可用RMPI 1640進行體外培養。實驗室一般將RPMI 1640作為實驗和細胞維持的基本培養液，目前RPMI 1640是應用最為廣泛的培養基之一。
應用：
1、用于人類白血病細胞懸浮液單層細胞培養。
2、用于疫苗企業病毒株的傳代培養供后續抗原的制備。
3、用細胞培養基礎液。
4、用于動物疫病病毒采樣及病毒分離和維持液的基礎液。
注意事項
僅限科研用。
培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
| 儀器 | 試劑 | 耗材 |
| 離心機 | 胎牛血清（FBS） | 離心管（15ml、50ml） |
| 生物安全柜 | 無菌 1×PBS pH=7.2 | T-25 細胞培養瓶 |
| 電動移液器 | 0.25%+0.02%EDTA | 一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml） |
| CO2 培養箱 | 培養基（含血清） | 1.8mL 凍存管 |
| 倒置顯微鏡 | 凍存液：90%FBS+10%DMSO | 程序降溫盒 |
復蘇
1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；
2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養基，放入 37℃水浴鍋中預熱；
3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中
復溫晃動凍存管以提高復溫速率；
4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；
5) 準備一個 T-25 培養瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養基；
6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養中，混勻后轉入
CO2 培養箱中培養靜置。
傳代 （細胞傳代建議一傳二）
1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。
2) 在生物安全柜內，打開培養瓶瓶口，收集瓶內的培養基；
3) 向培養瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養瓶，使PBS 能夠浸潤到培養瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；
4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養基中，將懸液吸入 15ml 離心管；
① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養基；
② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養瓶中加入 1ml 繼續消化 2min 左右，輕拍培養瓶，95%左右細胞脫。
6) 1000rpm 離心 5min；
7) 準備兩個新的 T-25 培養瓶，各加入 4ml培養基。
8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養瓶，每個培養瓶各 1ml；
9) 水平放置培養瓶，震蕩混勻后，將培養瓶置于 37℃，5%CO2培養箱中靜置培養。
凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）
1）~6）參照傳代步驟
7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；
8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；
9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。
| 人乳腺癌細胞帶紅色熒光MDA-MB-231+RFP(STR鑒定正確) | RNase噴霧清除劑 |
| 人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SKOV3+luc (STR鑒定正確) | 表面RNase清除劑 |
| 人皮膚成纖維細胞Hs865.Sk(STR鑒定正確) | RNA長效保存液 |
| 人Burkitt’s淋巴瘤細胞熒光素酶RAJI+LUC(STR鑒定正確) | RNase抑制劑(小鼠源) |
| 綿羊肺成纖維細胞OAR-L1（種屬鑒定） | RNase抑制劑(人源) |
| B細胞淋巴瘤DOHH2(STR鑒定正確) | Oligo(dT)纖維素 |
| 人胃癌細胞SNU-16(STR鑒定正確) | 一站式miRNA柱式提取試劑盒 |
| 人多發性骨髓瘤細胞ARD(STR鑒定正確) | miRNA分離純化試劑盒(沉淀法) |
| 大鼠少突膠質前體細胞系OLN-93（種屬鑒定） | 柱式病毒RNA提取試劑盒 |
| 小鼠急性骨髓性白血病-綠色+熒光素酶標記C1498-GFP+LUC | 柱式病毒RNA-DNA共提試劑盒 |
| 人食管鱗癌細胞KYSE-140(STR鑒定正確) | 一管式病毒RNA提取試劑盒 |
| 犬腎細胞 MDCK-II（種屬鑒定） | 柱式細菌RNA提取試劑盒 |
| 人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-2 (STR鑒定正確) | 柱式分枝桿菌RNA提取試劑盒 |
| 人小細胞肺癌細胞NCI-H196(STR鑒定正確) | 細菌RNA提取試劑盒 |
| 人肺支氣管癌細胞NCI-H1666(STR鑒定正確) | 植物RNA柱式提取試劑盒2.0 |
| 小鼠膠質瘤細胞GL261（種屬鑒定） | 植物RNA柱式提取試劑盒 |
| 人慢性B細胞白血病細胞MEC-1(STR鑒定正確) | 藻類RNA柱式提取試劑盒 |
| 人急性淋巴母細胞白血病細胞MT-4(STR鑒定正確) | 植物RNA提取專用高鹽溶液 |
| 小鼠肝癌細胞帶熒光素酶Hepa 1-6+LUC(種屬鑒定) | 血液RNA柱式提取試劑盒 |
| 人甲狀腺癌細胞KHM-5M(STR鑒定正確) | 血清血漿游離RNA提取試劑盒 |
| 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞綠色熒光標記 RAW264.7+GFP（種屬鑒定） | RPMI-1640 培養基軟體動物RNA柱式提取試劑盒 |
| 高轉移人肝癌細胞MHCC97-H(STR鑒定正確) | 軟骨RNA柱式提取試劑盒 |
?無菌操作?：細胞培養需在無菌環境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。
?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。
?試劑選擇?：所用培養液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養液。
?培養條件?：多數哺乳動物細胞適宜培養溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養通常需5%CO2以維持培養液pH值穩定。培養箱內濕度應保持在95%左右。
?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態、生長狀態與培養液顏色變化。
?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。
化工儀器網