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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠主動脈外膜成纖維細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1323 |
商品介紹：
名稱 大鼠主動脈外膜成纖維細胞 2.組織來源：主動脈組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠主動脈外膜成纖維細胞分離自主動脈血管外膜組織；血管外膜是由疏松結締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結締組織細胞以成纖維細胞為主，當血管受損傷時，成纖維細胞具有修復外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細胞是血管外膜的主要組成細胞之一，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠主動脈外膜成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠主動脈外膜成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R219 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳3-5代左右；3代以內狀態最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IL1R1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 IL6ST / gp130 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 LAMP2 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 REG1A / PSPS 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 XEDAR / EDA2R 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠主動脈外膜成纖維細胞吡咯 99%聚乙烯縮丁 航空級Anti-NF-66/a-Internexin/FITC 熒光素標記α-中連蛋白抗體IgG
吡咯烷 99%聚乙烯縮丁 M.W.40,000-70,000Anti-NFAM1/CNAIP/FITC 熒光素標記NFAM1抗體IgG
葡萄糖 AR聚乙烯縮丁 M.W.90,000-120,000Anti-NFATc1/FITC 熒光素標記活化T核因子1蛋白抗體IgG
葡萄糖 CP聚乙烯縮丁 M.W.170,000-250,000Anti-NFBD1/MDC1/FITC 熒光素標記DNA損傷關卡蛋白1抗體IgG
葡萄糖 GR，99%二硅化鉬 99%Anti-p-NFATc2/FITC 熒光素標記化NFATc2抗體IgG
葡萄糖 ACS鋁鎳合金 Ni：47%Anti-NF-H/FITC 熒光素標記高分子量神經絲蛋白抗體IgG
葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)氧化鈣 <160 nm particle size (BET), 98%Anti-Phospho-Merlin (Ser518) /FITC 熒光素標記化2型神經纖維瘤抗體IgG
葡萄糖 分析標準品氯亞鉑酸銨 鉑含量：52.0%Anti-NF-L/FITC 熒光素標記低分子量神經絲蛋白抗體IgG
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