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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠冠狀動脈內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X0971 |
商品介紹：
名稱 大鼠冠狀動脈內皮細胞 2.組織來源：冠狀動脈 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠冠狀動脈內皮細胞分離自冠狀動脈組織；冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型：右優勢型、均衡型、左優勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支。左冠狀動脈為一短干，發自左主動脈竇，經肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。冠狀動脈內皮細胞呈單層扁平分布，是一薄層的專門上皮細胞，它形成冠狀動脈的內壁，是血管管腔內血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內皮細胞是沿著整個循環系統，由心臟直至最小的微血管。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠冠狀動脈內皮細胞采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結合內皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠冠狀動脈內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R081 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態內皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
大鼠 MKRN2 基因全長ORF克隆
大鼠 CCT3 基因全長ORF克隆
大鼠 LDHA 基因全長ORF克隆
大鼠 PGK1 基因全長ORF克隆
大鼠 ADK 基因全長ORF克隆
大鼠 YWHAH 基因全長ORF克隆
大鼠 TECR 基因全長ORF克隆
大鼠 APMAP 基因全長ORF克隆
大鼠 SRSF3 基因全長ORF克隆
大鼠 BPGM 基因全長ORF克隆
大鼠冠狀動脈內皮細胞培養基B（EP標準） 英文名稱： 產品規格：250g
0.156-10 ng/mL 病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
0.312-20 ng/mL 人β-防御素14(β-DF14)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人西梅脫寡肽(Thimet oligopeptidase)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ryanodine receptor 1
15.6-1000 pg/mL 人腺苷酸環化10(ADCY10)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Myeloperoxidase
15.6-1000 pg/mL 生物蝶呤(biopterin)ELISA試劑盒
0.312-20 ng/mL 人Toll樣受體5(TLR5)ELISA試劑盒
胰蛋白胨水培養基 英文名稱：Trytone Water medium 產品規格：250g
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