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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 小鼠肝非實質細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1389 |
商品介紹：
名稱 小鼠肝非實質細胞 2.組織來源：肝組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 小鼠肝非實質細胞分離自肝臟組織；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用；肝臟也消化系統中之膽汁。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機體位置和形態結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復蓋，僅在腹上區、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實質細胞具有肝功能的單位，是肝臟的基本組成單位之一。肝非實質細胞是指除了肝實質細胞之外的細胞，主要包含了肝竇內皮細胞、肝星狀細胞、肝枯否細胞。 5.方法簡介： 實驗室分離的小鼠肝非實質細胞采用取肝臟灌流、膠原酶消化、密度梯度離心法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的小鼠肝非實質細胞經過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-M304 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性懸浮 細胞形態圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 MANF / ARMET 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 SPINK4 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 VNN1 / Vanin-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 IL1R1 / CD121a 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 Lactotransferrin / LTF 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
SCN3B 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
NRG1-alpha (ECD) 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠肝非實質細胞糖原 ≥90% 苯甲 AR,>98.5%(GC)Anti-Phospho-LKB1 (Thr189) /FITC 熒光素標記化/蛋白激抗體IgG
甘油 for molecular biology, ≥99%2-叔丁基 99%Anti-LN /FITC 熒光素標記層粘連蛋白抗體IgG
甘油 無菌,for molecular biology, ≥99%2,4-二叔丁基酚 97%Anti-Integrin alpha 4,beta 7(LPAM-1)/FITC 熒光素標記整合素α4β7抗體IgG
纖維素 80～125mpa.s，25℃ 2,6-二叔丁基酚 98%Anti-HRH3/GPCR97/FITC 熒光素標記組織H3受體抗體IgG
順式-4-羥基-L-脯 98%2,4,6-三叔丁基酚 99%Anti-HRH4/GPCR105/FITC 熒光素標記組織H4受體抗體IgG
羥賴 97% AR,99.0%Anti-LOX-1/OLR1/FITC 熒光素標記凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體IgG
潮霉素B溶液 50mg/ml溶液 ACSAnti-Lpin1 protein/FITC 熒光素標記Lpin1 抗體IgG
潮霉素B 超純級 99.99% metals basisAnti-Lpin1 protein/FITC 熒光素標記Lpin1 抗體IgG
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