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耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒操作步驟
閱讀：228 發(fā)布時間：2021-10-19耗牛免疫球蛋白GELISA檢測試劑盒操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在di一、第二孔中分別加標準品100μl，然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘。
LX-2, 人肝星形細胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞
C2C12, 小鼠肌原細胞
細胞名稱
MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞
MDA-MB-231（ATCC來源）, 人乳腺癌細胞
Raji，人Burkitt's淋巴瘤細胞
Saos-2，人成骨肉瘤細胞
Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細胞
NCI-N87 [N87]人胃癌細胞
MGC80-3（MGC-803）人胃癌細胞
EC109，人食管癌細胞
HGC-27人胃癌細胞
AGS人胃腺癌細胞
U251人膠質(zhì)瘤細胞
THP-1人單核白血病細胞
HuH-7人肝癌細胞
SK-MEL-1, 人皮膚黑色素瘤細胞
A549, 人肺癌細胞系
SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐藥細胞株
A-375 [A375], 人惡性黑素瘤細胞株
A549/DDP, 人肺腺癌耐藥細胞株
SP2/0, 小鼠骨髓瘤細胞
WM35, 人黑色素瘤細胞
BxPC-3, 人原位胰腺腺癌細胞株
U-2 OS, 人骨肉瘤細胞
WM451, 人黑色素瘤細胞
SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌細胞
C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞
UM-UC-3, 人膀胱移行細胞癌
Hela, 人宮頸癌細胞系
HNE2, 人鼻咽癌細胞系
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢癌腺癌細胞系
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系
Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞