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技術文章

組織相容性抗原HLAF抗體的生物素化標記實驗要點

閱讀:388          發布時間:2021-6-22

組織相容性抗原HLAF抗體的生物素化標記實驗要點:

1.如在反應混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會抑制標記反應。因此,蛋白質在反應前要對 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質之間的分子比按蛋白質表面的ε-氨基的密度會有所不同,選擇不當則影響標記的效率,應先用幾個不同的分子比來篩選最適條件;
3.用NHSB量過量也是不利的,抗原的結合位點可能因此被封閉,導致抗體失活;
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等;
5.當游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結合位點時,或位于酶的催化位點時,生物素化會降低或損傷抗體蛋白的結合力或活性;
6.生物素還可能與不同的功能基團,如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價結合;
7.交聯反應后,應充分透析,否則,殘余的生物素會對生物素化抗體與親和素的結合產生競爭作用;
8.在細胞的熒光標記實驗中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對某些細胞可導致高本底。

磷酸化Ack1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體
磷酸化毛細血管擴張性共濟失調癥突變蛋白抗體
磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體
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細胞核重定位及紡錘體檢查點蛋白AMN1抗體
天門冬酰胺連接糖基化11抗體
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腺苷A1A受體抗體
芳基硫酸酯酶B抗體
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共濟失調蛋白2結合蛋白1抗體
腫瘤壞死因子α轉換酶

 

 

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