快速內切酶BspQI屬于 Type IIS 型限制酶,識別非回文序列,并在識別序列之外進行切割,常用于Golden Gate組裝。經過優化的反應 Buffer使BspQI最大限度發揮功能,同時反應緩沖液包含重組白蛋白,其可增強多種酶的穩定性。
識別位點:
5'...C G T C T T C (N)1↓...3'
3'...G C A G A A G (N)4↑...5'
同裂酶:SapI, LguI, PciSI
注:同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。
建議反應條件:
1× HN 緩沖液;
50℃溫育;
參照“DNA 酶切流程"配制反應體系。
失活條件:
80℃溫育 20 min
產品組成:
組分 | 規格 |
BspQI (10 U/μl) | 50ul |
10× HN Buffffer | 1ml |
質量控制:
超長時間溫育檢測 :
最適反應溫度下,將 10 U BspQI 與 1 μg λDNA 共同溫育 3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測:
最適反應溫度下,使用10 U BspQI消化底物,回收酶切產物。在22℃下使用適量T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后,使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。
DNase 殘留檢測:
將10 U BspQI與雙鏈DNA底物在 37℃溫育 16 h,通過 DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。