背景介紹
裸露的RNA是帶負(fù)電荷的親水性大分子，因?yàn)榧?xì)胞膜的靜電排斥，難以進(jìn)入細(xì)胞，且易被無處不在的RNA酶快速降解，所以需要保護(hù)性外殼才能進(jìn)入細(xì)胞。細(xì)胞膜的組成主要是脂質(zhì)，利用脂質(zhì)囊泡包封RNA穿過細(xì)胞膜并將RNA釋放到細(xì)胞質(zhì)中。囊泡應(yīng)該是一種帶正電的脂質(zhì)，才能夠結(jié)合帶負(fù)電的RNA。
然而，由永jiu性陽離子脂質(zhì)組成的囊泡由于能與帶負(fù)電的細(xì)胞膜發(fā)生靜電作用而引起細(xì)胞毒性，脂質(zhì)結(jié)構(gòu)才能夠?qū)?nèi)體酸性環(huán)境響應(yīng)而帶正電荷的分子。
脂質(zhì)納米粒結(jié)構(gòu)
LNP通常由四種關(guān)鍵成分組成：可離子化的陽離子脂質(zhì)、磷脂（兩性離子脂質(zhì)）(PL)、膽固醇和PEG化脂質(zhì)。
脂質(zhì)納米粒遞送機(jī)制
脂質(zhì)納米粒(LNP)作為mRNA的傳遞系統(tǒng)，其作用機(jī)制涉及多個(gè)步驟，確保mRNA安全有效地遞送到目標(biāo)細(xì)胞并表達(dá)蛋白。在LNP中，可電離的陽離子脂質(zhì)發(fā)揮著重要作用，因?yàn)樗梢詭д姾傻陀谄銴a以介導(dǎo)在自組裝成LNP期間負(fù)載帶負(fù)電荷的RNA，在中性pH下不帶電以最大限度地減少毒性，并在細(xì)胞吸收后再次帶正電荷以促進(jìn)內(nèi)體逃逸隨著內(nèi)體pH降低。膽固醇和PEG脂質(zhì)的變體已被證明可以調(diào)節(jié)LNP物理性質(zhì)、納米結(jié)構(gòu)和最終功效。兩性離子磷脂通常被稱為“輔助脂質(zhì)"。LNPs在保護(hù)mRNA、促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)傳遞、以及激活免疫反應(yīng)方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。
LNP轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟
下述轉(zhuǎn)染步驟中為6孔板單孔參考條件。對于其他培養(yǎng)形式，請參考表1。
1、mRNA 預(yù)混液制備
將2.5ug mRNA（濃度為1ug/uL）與60uL Buffer混合。
2、mRNA-easyLNP復(fù)合物
將62.5uL mRNA預(yù)混液與62.5uL easyLNP納米混懸液混合，渦旋2-3s，混勻。
3、加入細(xì)胞
將125uL mRNA-easyLNP復(fù)合物加入細(xì)胞，輕輕晃動(dòng)使均勻分散。
4、分析時(shí)間
培養(yǎng)24-48h后分析。
表1 根據(jù)每孔使用的細(xì)胞培養(yǎng)容器的mRNA轉(zhuǎn)染指南
mRNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染步驟 | 試劑 | 96孔板 | 24孔板 | 6孔板 |
（1）40ng/μL mRNA預(yù)混液制備 | Buffer(以mRNA原液濃度1μg/μL為例) | 2.4μL | 12μL | 60μL |
mRNA | 0.1μg | 0.5μg | 2.5μg | |
（2）mRNA-easyLNP復(fù)合物制備 | easyLNP納米混懸液 | 2.5μL | 12.5μL | 62.5μL |
mRNA預(yù)混液 | 2.5μL | 12.5μL | 62.5μL | |
（3）加入細(xì)胞 | mRNA-easyLNP復(fù)合物 | 5μL | 25μL | 125μL |
實(shí)驗(yàn)示意圖：
產(chǎn)品推薦：
轉(zhuǎn)染方式 | 貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
細(xì)胞 | abs60339 | mRNA轉(zhuǎn)染試劑 | 1mL |
abs60620 | easyLNP™ mRNA免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | 1.5mL/3mL/5mL | |
abs60621 | easyLNP™ Plus通用型RNA細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒 | 1.5mL/3mL/5mL | |
abs60322 | Lipofect5000質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5mL/1.0mL | |
abs60255 | 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒(貼壁細(xì)胞) | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60256 | PM原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60327 | SP懸浮細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60369 | RF 293細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5mL/1.5mL | |
abs60259 | 核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60324 | PM原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60325 | SP懸浮細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑盒 | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60252 | 小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60253 | PM原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60254 | SP懸浮細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑 | 0.1mL/0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs60317 | 核酸共轉(zhuǎn)染試劑 | 0.5mL/1.0mL/1.5mL | |
abs7993 | 50nm磁轉(zhuǎn)染試劑 | 100uL | |
轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑 | abs42025397 | 聚凝胺溶液 | 1mL |
abs42085824 | 海美溴銨 | 5g | |
abs42085198 | 魚精蛋白硫酸鹽 | 5g/25g | |
動(dòng)物體內(nèi) | abs60622 | easyLNP™ mRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑盒(全身作用) | 0.3mL/0.5mL/1mL |
abs60623 | easyLNP™ mRNA體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑盒(局部作用) | 0.3mL/0.5mL/1mL | |
核酸轉(zhuǎn)染(動(dòng)物體內(nèi)) | abs60258 | Elite Fect-I小核酸活體組織轉(zhuǎn)染試劑(小鼠轉(zhuǎn)染) | 3只/6只 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測)；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
會(huì)員.png)
9
立即詢價(jià)
您提交后，專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)