在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，二抗的選擇至關(guān)重要。其中，HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗是兩種常見的二抗類型，它們各具特色，并在不同的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景下發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
一、HRP酶標(biāo)二抗
1. 定義及特性
HRP酶標(biāo)二抗，即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)標(biāo)記的二抗，是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常規(guī)用的二抗。其特點(diǎn)包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等，因此在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。
2. 應(yīng)用場(chǎng)景
HRP酶標(biāo)二抗常用于如免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)以及免疫組織化學(xué)(IHC)等實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，HRP標(biāo)記的二抗與底物反應(yīng)，產(chǎn)生可檢測(cè)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的檢測(cè)。例如，在WB實(shí)驗(yàn)中，HRP酶標(biāo)二抗能夠檢測(cè)樣品中的特定蛋白，并通過ECL試劑顯色，使信號(hào)可視化。
HRP在不同實(shí)驗(yàn)中對(duì)應(yīng)的底物及檢測(cè)原理和方法
實(shí)驗(yàn) | 底物 | 檢測(cè)原理和方法 |
WB | Luminol和H2O2 | 魯米諾在堿性條件下與過氧化氫（H2O2）反應(yīng)，在辣根過氧化物酶（HRP）的催化下產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)，可用CCD凝膠成像儀進(jìn)行檢測(cè)。 |
Elisa | TMB | 在HRP的作用下，TMB被氧化并產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，隨后在強(qiáng)酸條件下變?yōu)辄S色。使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)。 |
HIC | DAB | DAB常用于組織化學(xué)和免疫組化實(shí)驗(yàn)，與HRP反應(yīng)后形成不溶性棕色沉淀物，可以使用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)。 |
二、熒光二抗
1. 定義及特性
熒光二抗，即帶有熒光基團(tuán)的二抗，能夠在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號(hào)。常用的熒光基團(tuán)包括Cy3、Cy5、Alexa Fluor等。這些熒光基團(tuán)具有不同的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，可以實(shí)現(xiàn)多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)中的不同顏色標(biāo)記。
2. 應(yīng)用場(chǎng)景
熒光二抗廣泛應(yīng)用于免疫熒光（IF）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）以及流式細(xì)胞儀（Flow cytometry）等實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，熒光二抗與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀等設(shè)備檢測(cè)熒光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的定位和定量。例如，在IF實(shí)驗(yàn)中，熒光二抗可以標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白，并通過熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。
3. 多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)
熒光二抗在多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)中具有特殊優(yōu)勢(shì)。通過選擇不同激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的熒光基團(tuán)，可以實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)蛋白的同時(shí)檢測(cè)。例如，可以使用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594兩種熒光基團(tuán)分別標(biāo)記兩種不同的目標(biāo)蛋白，并通過熒光顯微鏡同時(shí)觀察它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。
三、酶標(biāo)二抗和熒光二抗的對(duì)比
HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗各具特色，分別在不同的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景下發(fā)揮關(guān)鍵作用。HRP酶標(biāo)二抗以其高靈敏度和穩(wěn)定性在WB、ELISA和IHC等實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用；而熒光二抗則以其特殊的熒光信號(hào)和多標(biāo)染色能力在IF、ICC和流式細(xì)胞儀等實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出特殊優(yōu)勢(shì)。在實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)具體需求和實(shí)驗(yàn)條件選擇合適的二抗類型，以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。
| HRP酶標(biāo)二抗 | 熒光二抗 |
定義 | 辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗 | 帶有熒光基團(tuán)的二抗 |
特性 | 催化底物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào) | 在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號(hào) |
應(yīng)用場(chǎng)景 | 免疫印跡（WB）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫組織化學(xué)（IHC）等 | 免疫熒光（IF）、免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）、流式細(xì)胞儀（Flow cytometry）等 |
靈敏度 | 高，可挑戰(zhàn)fg級(jí)別 | 中等至高，取決于熒光基團(tuán)和檢測(cè)設(shè)備 |
多標(biāo)染色 | 不適用于多標(biāo)染色 | 適用于多標(biāo)染色，可同時(shí)檢測(cè)多種目標(biāo)蛋白 |
信號(hào)穩(wěn)定性 | 相對(duì)穩(wěn)定，不易受外界因素影響 | 對(duì)光敏感，需避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)光下 |
可視化方法 | 化學(xué)發(fā)光成像（如ECL試劑顯色） | 熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè) |
操作簡(jiǎn)便性 | 操作相對(duì)簡(jiǎn)單，但可能涉及化學(xué)發(fā)光底物的處理 | 操作簡(jiǎn)便，直接通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察 |
成本 | 相對(duì)較低（基于常規(guī)生化試劑） | 可能較高，尤其是高級(jí)熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀的使用 |
優(yōu)點(diǎn) | 高靈敏度、穩(wěn)定性好、成本相對(duì)較低 | 多標(biāo)染色能力強(qiáng)、可視化效果好、操作簡(jiǎn)便 |
缺點(diǎn) | 不適用于多標(biāo)染色、對(duì)底物量有一定要求 | 對(duì)光敏感、成本可能較高 |
Absin產(chǎn)品線：
爆款產(chǎn)品：試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測(cè)、殘留檢測(cè)、多因子檢測(cè))；細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠，胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒；分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒)；化合物大包裝；輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
特色產(chǎn)品：雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...
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