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PMA(TPA),佛波酯,16561-29-8

閱讀:2332      發布時間:2020-8-17
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PMA(TPA)佛波酯是一種廣泛用于體內外實驗的佛波酯(phorbol ester) PKC激活劑。PMA結合PKC(Ki =2.6 nM)并激活其功能,在細胞和組織中都呈現出極其廣的抑制譜。PMA可以抑制Fas誘導的細胞凋亡,但又可以誘導HL-60細胞的凋亡。PMA是一種高效的腫瘤促進劑,可以促進小鼠皮膚瘤的形成。盡管PMA毒性較強,但是在人體內仍顯示出抗白血病和抗中性白細胞減少的活性。

圖一. PMA結構圖

體外研究 :為了檢查PKC在p38MAPK磷酸化中的作用,用PKC活化劑PMA(100nM)刺激細胞,其模擬PKC的天然活化劑DAG與PKC的C1區的結合。在與αT3-1細胞中GnRH觀察到的類似的兩種細胞類型中觀察到PMA的p38MAPK磷酸化,即緩慢的持續激活(分別在30分鐘時為3.2倍和3.6倍)。由GnRH和PMA激活的PKC在p38MAPK磷酸化中起不同作用的矛盾發現可以通過PKC的差異定位來解釋。 αT3-1細胞中p38MAPK磷酸化的基礎,GnRH-和PMA-刺激是通過電壓門控Ca2 +通道和Ca2 +動員的Ca2 +流入介導的,而在分化的LβT2促性腺細胞中,它僅通過Ca2 +動員介導[2]。 

體內研究: PMA是PKC激動劑,其逆轉由5-羥基癸酸(5-HD)誘導的損傷。因此,mitoKATP的激活通過PKC途徑保護SOD和MDA中的線粒體功能[3]。

細胞實驗:αT3-1和LβT-2細胞在補充有10%胎牛血清(FCS)和L-谷氨酰胺2mM,青霉素和鏈霉素(100單位/ mL)的DMEM中在37℃加濕培養箱中培養5%CO2培養。 C。在同一培養基中血清饑餓為0.1%FCS,持續16小時。然后如所示,將GnRH和PMA添加一段時間。通常,αT3-1細胞通過ExGen 500或jetPRIME瞬時轉染,而LβT2細胞僅通過jetPRIME轉染試劑轉染。對于顯性陰性(DN)PKC的實驗,用1.5μgp38α-GFP和3μg對照載體,pCDNA3或3μgDN-PKC構建體轉染αT3-1細胞(在6cm平板中)。對于LβT2細胞,用4μgp38α-GFP以及9μg對照載體,pCDNA3或9μgDN-PKC構建體進行轉染(在10cm平板中)。轉染后約30小時,將細胞血清饑餓(0.1%FCS)16小時,然后用GnRH或PMA刺激,用冰冷的PBS洗滌兩次,用裂解緩沖液處理,然后進行一次凍融循環。收獲細胞;離心(15,000×g,15分鐘,4℃)后,取上清液進行免疫沉淀實驗[2]。

動物實驗:大鼠[3]所有實驗均用雄性Wistar大鼠(體重250-280g)進行。將125只Wistar大鼠隨機分成7組。 (1)假手術組(n = 21)給予側腦室注射0.9%生理鹽水; (2)IR組大鼠(n = 21)在大腦中動脈閉塞(MCAO)前30 min給予側腦室注射0.9%生理鹽水; (3)在MCAO前30分鐘,給予Carbenoxolone(CBX)組(n = 21)大鼠側腦室注射CBX(5μg/ mL×10μL); (4)在MCAO之前30分鐘,給二氮嗪(DZX)組(n = 21)的大鼠腹側注射DZX(2mM×30μL); (5)對5-HD組(n = 21)的大鼠進行5-HD(100mM×10μL)的側腦室注射,10分鐘后,在MCAO前15分鐘注射DZX; (6)給DZX + Ro組大鼠(n = 15)注射DZX側腦室,10分鐘后,在MCAO前15分鐘注射Ro-31-8425(400μg/ kg); (7)注射5-HD和DZX后,給5-HD + PMA組(n = 15)的大鼠腹膜內注射PMA(200μg/ kg)。 
 

參考文獻 :
[1]. Xu F, et al. Protein kinase C-mediated Ca2+ entry in HEK 293 cells transiently expressing human TRPV4. Br J Pharmacol. 2003 Sep;140(2):413-21. 
[2]. Mugami S, et al. Differential roles of PKC isoforms (PKCs) and Ca2+ in GnRH and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulation of p38MAPK phosphorylation in immortalized gonadotrope cells. Mol Cell Endocrinol. 2017 Jan 5;439:141-154. 
[3]. Hou S, et al. Mechanism of Mitochondrial Connexin43's Protection of the Neurovascular Unit under Acute Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury. Int J Mol Sci. 2016 May 5;17(5). pii: E679. 
[4]. Zhang T, et al. MPTP-Induced Dopamine Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247. 

佛波酯(PMA)產品相關規格及價格:

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   abs9107   佛波酯(PMA)   1mg   560
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 本文來源于網絡

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