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背景介紹

酶聯免疫分析技術（ELISA）廣泛應用于抗原、半抗原或抗體的定量或定性分析，辣根過氧化物酶（HRP）是 ELISA 技術常用的一種酶，能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）發生顯色反應，從而進行定量或定性分析。

由于 TMB 比其他顯色底物具有更高的靈敏度且無致癌性、故而被廣泛使用，TMB 主要應用于 ELISA、WB、免疫斑點雜交或免疫組化等實驗，也有報道將其用于氯的檢測分析等。

TMB工作原理

HRP 或其他適當過氧化物酶能催化TMB生成可溶的藍色產物， 此時通常可在 370nm 測定吸光度。當顯色反應被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）終止后，產物由藍色轉為黃色，此時可在 450nm 測定吸光度。

傳統TMB顯色液（雙組分）

通常 TMB 顯色試劑以雙組分（A/B液）的形式提供，分別含H2O2和TMB，需要在使用前按1:1比例配制，具有以下缺點：

▲較容易產生沉淀；
▲使用起來相對不便；
▲較易導致檢測結果誤差。

愛必信單組分TMB顯色液優勢

作為高品質生命科學產品的中國品牌，愛必信生物研發推出的abs9178 單組分TMB顯色液，顯色試劑由單一溶液組成，有效簡化了操作步驟，并且檢測結果更加穩定可靠。其具有以下優勢：

▲即用型溶液，含H2O2和TMB，單組分溶液形式，無需混合，方便快捷減少誤差；
▲檢測靈敏度高，線性濃度范圍寬；
▲含優化的穩定劑，2-8℃避光保存，有效期24個月以上；
▲低背景，質量穩定，批間差異小。

使用方法

▲使用之前，取出適量單組分 TMB 顯色液，使其恢復到室溫再開始使用；▲
▲參考 ELISA 檢測試劑盒的實驗步驟，當與 HRP 標記抗體孵育一段時間后，用適當洗滌液洗滌 3-5 次， 每次 3-5min；
▲洗滌完畢后，去除洗滌液，加入 100μl 單組分 TMB 顯色液；
▲室溫避光孵育 5-30min 或更長時間（可長達 24h），直至顯色到預期深淺。【注意】：建議根據實驗需求選擇比較佳試劑用量、顯色時間和反應溫度；
▲直接在 370nm 測定吸光度。或者加入 100μl 0.5-2M H2SO4 終止反應，隨后在 450nm 測定吸光度。

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