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支原體PCR絕對定量標準品

Quantification Standards DNA

符合歐洲藥典（EP）和日本藥典（JP）要求的支原體檢測標準品。歐洲藥典第2.6.7章(EP 2.6.7)和日本藥典(第17版)第G3章(JP G3)描述了基于NAT（核酸擴增檢測的英文簡稱，包括PCR/qPCR）的支原體檢測。如果用NAT法替代培養(yǎng)法檢測支原體時，則要求顯示每毫升樣品體積(CFU/ml)中10個菌落形成單位的檢測，即靈敏度需達到10CFU/ml。

支原體PCR絕對定量標準品適用范圍：

基于以上檢測要求，在質(zhì)量控制和符合 EP 2.6.7 的檢測背景下，還對 PCR 檢測的特異性和測試靈敏度進行檢驗，以符合標準。德國Minerva Biolabs公司的支原體PCR絕對定量標準品（PCR Quantification Standards）可在以上條件下，對qPCR實驗的靈敏度和特異性進行檢測。

PCR絕對定量標準品含所選微生物物種的純的、定量的基因組DNA。該產(chǎn)品被設計為輔助定量PCR分析的工具。因此，除方法驗證外，支原體PCR定量標準品（PCR Quantification Standards）也適用于常規(guī)PCR和qPCR的設定微生物基因組的標準曲線繪制：每一種PCR定量標準品均可通過連續(xù)稀釋產(chǎn)生特定微生物的基因組DNA標準曲線。

支原體PCR絕對定量標準品可提供以下產(chǎn)品內(nèi)容：

1、藥典 EP第2.6.7章中所列出的所有10種支原體菌株。

2、額外有：Pseudomonas aeruginosa（Cat. No. 52-0071）、Bordetella pertussis（Cat. No. 52-5571）、Escherichia coli（Cat. No. 52-0083）、Legionella pneumophila（Cat. No. 52-0101）這幾種菌株的定量標準品可供選購。

3、從特定微生物中提取的基因組DNA，培養(yǎng)傳代次數(shù)較低，用于生產(chǎn)標準品的微生物在液體培養(yǎng)基中生長，并在對數(shù)生長階段結(jié)束時收獲。

4、使用標準化方法分析DNA起始材料，以確定DNA的完整性和數(shù)量。

5、只有純的、完整的、在瓊脂糖凝膠中顯示> 10 kb 條帶的、且OD 260/280 > 1.8的DNA可用于產(chǎn)品生產(chǎn)。

6、從每個培養(yǎng)中分離DNA，通過熒光分析定量，最后稀釋以調(diào)整最終濃度(每瓶1 × 10^8個基因組拷貝)。

7、每種微生物的身份通過Sanger測序確認，針對基因組中的物種特定區(qū)域。凍干PCR定量標準品，提高產(chǎn)品穩(wěn)定性。

支原體PCR絕對定量標準品復溶操作

1.標準品短時離心，以收集凍干粉至管底。

2.取試劑盒提供的Tris緩沖液（白蓋）100 µl，加入到標準品管內(nèi)（綠蓋）。

3.室溫下靜置5分鐘。

4.渦旋混合10秒鐘，離心5秒鐘。

5.選合適體積的復溶DNA用于PCR擴增或梯度稀釋，以制備標準曲線。

多種可選的產(chǎn)品類別

• 符合藥典要求的10CFU/100CFU支原體檢測滅活標準品：

10 CFU™ Mycoplasma Sensitivity Standards

100 CFU™ Mycoplasma Sensitivity Standards

• 濃度經(jīng)滴度測定的純化支原體基因組DNA：

Genomic DNA extracts

效期及儲存條件：

每個產(chǎn)品上都注明了到期日期。

未開封的試劑盒應儲存在+2至+8°C。