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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
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貨號 | YS-02X9829 | 應用領域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研使用 |
規格:1×10?cells/T25培養瓶
貨號:YS-02X9829
細胞生長實驗 :細胞生長良好,形態正常
儲存條件:2℃-8℃,避光儲存
運輸條件:冰袋冷藏運輸
公司產品僅用于科研
細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640 培養基;優質胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
注意事項:
(1)凍存前細胞狀態,細胞最好在對數生長期,細胞密度適合,剛剛發生細胞融合,過密或連成片的細胞狀態不好,而且消化時不容易分散;
(2)凍存的密度不宜過低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶凍一管(1.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個細胞)分成兩管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。
(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格,我從10%-90%都用過,問題不大,個人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。
(5)關于“慢凍",傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長,-80度過夜,最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步驟:
一)準確稱量試劑:根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值:將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾:將玻璃漏斗置鐵架上,再用人子宮成纖維細胞*培養基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝:將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌:培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。
細胞特性:
1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。
2)細胞鑒定:細胞免疫熒光染色為陽性。
3)經鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。
ZNF217/FITC 熒光素標記鋅指脂蛋白217抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 細胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
血管生成素-2抗體 ANG-2 hu, mo, rat, pig, dog, chi 0.1ml
ZNF185 英文名稱: 鋅指蛋白185抗體 0.2ml
DHFRL1 英文名稱: 二氫葉酸還原酶樣1抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537) 磷酸化雌受體α抗體 規格 0.1ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 細胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies規格: 0.5mg
P-Cadherin 人P-鈣粘附蛋白Multi-class antibodies規格: 48T
Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) 磷酸化細胞角蛋白17抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NS5ATP9/KIAA0101 丙型肝炎病毒非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體 規格 0.2ml
TMB-2HC3,3′,5,5′tetramethylbenzidine,TMB TMB 2HCl 3,3’5,5’-四甲基聯胺二鹽酸 250mg
TGM3 英文名稱: 谷酰胺轉胺酶3抗體 0.1ml
C9orf103 英文名稱: 9號染色體開放閱讀框103抗體 0.2ml
Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) 磷酸化細胞角蛋白17抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml
Dog IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗犬IgM抗體 0.1ml
FAM161B 英文名稱: FAM161B蛋白抗體 0.2ml
葡萄糖調節蛋白78抗體 GRP78 0.2ml
PNK1/PNKP/FITC 熒光素標記多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) 磷酸化S6核糖體蛋白抗體 規格 0.1ml
Rabbit mouse IgM 兔抗小鼠IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規格: 1mg
小鼠胰島素瘤胰島β細胞;Beta-TC-6氟尼辛葡通用型1毫升1厘米光徑石英比色皿
氟尼辛葡(標準品)200微升1厘米光徑玻璃比色皿
(含檸檬酸鹽緩沖液)200微升1厘米光徑塑料比色皿
純粉200微升1厘米光徑石英比色皿
AC-DC亞磷酰單體100微升1厘米光徑玻璃比色皿
2,2'-脫水-5-甲基尿苷100微升1厘米光徑塑料比色皿
7-DEAZA-7--2'-脫氧鳥苷100微升1厘米光徑石英比色皿
7-Deaza-7-I-2’-dA通用96孔
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