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資源名稱:

嬰兒雙歧桿菌保存

種屬:Bifidobacteriuminfantisreuter

安全等級   1

模式菌株   no

應用領域   乳制品發酵；食品飲料；模式菌株．厭氧

培養方法

培養基   61

生長條件   37℃

嬰兒雙歧桿菌保存檢測方法：

1．將病人標本和/或液狀對照品放至室溫（15-30℃），輕輕混勻。測試前從包裝袋中取出檢測卡平放。

2．將1根Binax樣本拭子浸入要測試的標本中，*浸沒拭子頭。如果拭子有滴水，將拭子靠在收集容器的邊上，排去多余的液體。

3．檢測卡內部的右手邊有兩個孔，將拭子插入底部的孔中（拭子孔），穩步向前推，使整個拭子頭在上部的孔中可見，不要取出拭子。

4．垂直持放A試劑瓶，高出檢測卡上方1/2到1英寸，慢慢向底部的孔中加入3滴A試劑。

5．立即從檢測卡的右緣揭去粘附襯，封閉檢測卡，過15分鐘在窗口判讀結果。15分鐘后讀取的結果可能不準確。然而，有些陽性病人不到15分鐘就出現可見樣品線。

嬰兒雙歧桿菌保存注意事項：

1.  取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。

2.  凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對細胞不是*無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作 較大，因此，必須在1-2min內使凍存液*融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進口產品。

3.  離心前須加入少量培養液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。

4.  離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除 DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大， 死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液 體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規的離心分裝的方法進行復蘇，結果無有異常。

5.  細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養液，而在我的試驗中的經驗總結為培養基越少細胞越容易貼附。

6.  復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經驗總結為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。

7.  加培養基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響 細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是 10％DMSO的話那么加10ml以上的培養基就恰好稀釋到了無害濃度。

CAS9049-37-0    多聚半乳糖醛酸鈉鹽    1g

CAS9050-68-4    葡聚糖凝膠 G-10    25g

CAS9050-94-6    瓊脂糖凝膠 2B    100mL

CAS9054-89-1    超氧化物歧化酶    10Ku

CAS9064-47-5    組蛋白    25g

CAS9064-47-5    核酸組蛋白 ( 小牛胸腺 )    250mg

CAS9067-32-7    透明質酸鈉    1g

CAS9068-54-6    磷酸二酯酶Ⅱ    10U

CAS9068-59-1    中性蛋白酶    10mg

CAS9087-70-1    抑肽酶    2mg

CAS91079-38-8    牛肉蛋白胨    500g

CAS91079-38-8    蛋白胨    250g

CAS91079-40-2    酶水解酪素    100g

CAS91510-62-2    D- 半乳糖醛酸    1g

CAS921-62-0    6- 磷酸葡萄糖鋇鹽    100mg

CAS92-31-9    甲苯胺藍    5g

CAS92-32-0    吡啰紅 G    5g

CAS92-71-7    2,5- 二苯基惡唑    5g