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雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3*操作步驟：

1. 將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

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細胞名稱 雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3*

形態特性  淋巴母細胞樣

生長特性 半貼壁生長

特征特性  可產生單克隆抗體；凍存前做支原體去除

培養條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS

傳代方法  保持細胞密度在1×105～1×106 cells/ml之間，每周換液2～3次

傳代情況

凍存條件  基礎培養基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養法（-）

STR  -

同工酶

染色體

使用權限 A類

雜交瘤（B類）；IB3C10H12A12G2H8F3*運輸保存：

采用干冰保存運輸。收到細胞時，若干冰已經*融化，請立即將細胞復蘇培養；若尚留有干冰，請立即將細胞放入液氮中保存待用，請按條件貯存細胞，切不可將細胞置于高溫環境。

保存條件：4℃保存一年;-20℃長期保存

用途：只可用于科研。

儲存：液氮。

運輸：干冰(第二代培養末期液氮凍存)。

細胞一般2-3天更換一次培養基，這取決于細胞生長的速度。許多細胞培養實驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。

注意：*次植入后，在6-16小時內更換培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細胞。到達客戶手中，出現任何問題（人為或者非人為），導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。對于細胞的真實性，支持客戶檢測對應的biomarker，（如證明細胞錯誤，全額退款。）公司針對每株細胞，鑒定gene background，鑒定完成的細胞可以提供數據，用于證明細胞的真實性，并且幫助客戶更多的了解細胞特性。

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