家兔皮膚來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 家兔皮膚來(lái)源細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一只出生三天的雌性家兔的耳皮膚組織。由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)于2014年建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 無(wú)
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 巖白菜素    分子式：    328.27144    分子量：    C14H16O9    英文名稱：    Bergeninum    CAS號(hào)：    477-90-7    
 槐角苷    分子式：    432.38    分子量：    C21H20O10    英文名稱：    Sophoricoside    CAS號(hào)：    152-95-4    
 穗花牡荊甙    分子式：    466.44    分子量：    C22 H26 O11    英文名稱：    Honoka Vitexin    CAS號(hào)：    11027-63-7    
 芒柄花苷    分子式：    430.4    分子量：    C22H22O9    英文名稱：    Flower stalk    CAS號(hào)：    486-62-4    
 環(huán)孢菌素C    分子式：    1218.61064    分子量：    C62H111N11O1    英文名稱：    Cyclosporine C.    CAS號(hào)：    59787-61-0    
 東莨菪素    分子式：    192.168    分子量：    C10H8O4    英文名稱：    Scopoletin    CAS號(hào)：    92-61-5    
 川芎嗪    分子式：    136.19    分子量：    C8H12N2    英文名稱：    Ligustrazine    CAS號(hào)：    1124-11-4    
 直接耐曬黃5GL    分子式：    662.62    分子量：     C25H20N4Na2O9S3    英文名稱：    Direct fast yellow 5GL    CAS號(hào)：    10190-68-8    
 全染色劑    分子式：        分子量：        英文名稱：    Total coloring agent    CAS號(hào)：    863827    
 弱酸性紅A    分子式：        分子量：        英文名稱：    Weak acid red A    CAS號(hào)：  雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V- 熒光素 555·7-AAD）    140629-50    50 次
Southern Marker DL2000(DIG)    120654D-20    20 次
30 次    石蠟包埋組織全基因組擴(kuò)增試劑盒    
100 次    動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒    
1g    溶酶    
250mg    胃蛋白酶    
氯化鎂六水    CAS7791-18-6    100g
木瓜蛋白酶抑制劑溶液，0.5 mg/mL    130533-10    10mL
50 次    柱式尿液 DNAout    
500 次    MTT 檢測(cè)試劑盒    
0.25mL    ATP 溶液，100mM    
50 次    一管式病毒 DNAout    
1mL    BL21（AI）種    
大腸桿 DNA 連接酶    120419-1000    1000U
單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)    130922-50    50 次
10 次    WGA 糖蛋白分離試劑盒    
100 次     H5N1 神經(jīng)氨酸酶抑制劑鑒定試劑盒    
100g    膽固醇    
250 mL    多聚甲醛 - 磷酸緩沖固定液    
L- 酪氨酸    CAS60-18-4    25g
HT 篩選培養(yǎng)基    19-0100-500     500mL
大提柱式血液 DNAout    80924-4    4次
100mL    瓊脂糖凝膠 4B