豚鼠心肌細(xì)胞；GP-H1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 豚鼠心肌細(xì)胞；GP-H1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來源于一雄性豚鼠的心臟組織。2003年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 2-羥基澤蘭內(nèi)酯    分子式：    248.31    分子量：    C15H20O3    英文名稱：    2- hydroxy eupatolide    CAS號(hào)：        
 蓮心堿高氯酸鹽    分子式：        分子量：    C37H42N2O6.xClHO4    英文名稱：    Liensinine perchlorate    CAS號(hào)：    2385-63-9    
 橄欖苦甙    分子式：    540.51378    分子量：    C25H32O13    英文名稱：    Olive bitter    CAS號(hào)：    32619-42-4    
 二氫丹參酮I    分子式：    278.30196    分子量：    C18H14O3    英文名稱：    Two h, I    CAS號(hào)：    87205-99-0    
 白楊素    分子式：    254.24    分子量：    C15H10O4    英文名稱：    Aspen    CAS號(hào)：    480-40-0    
 酸性藍(lán)41    分子式：    487.46    分子量：     C23H18N3NaO6S    英文名稱：    Acid blue 41    CAS號(hào)：    2666-17-3    
 二甲粉橙    分子式：        分子量：        英文名稱：    Two a powder orange    CAS號(hào)：        
 丫啶黃    分子式：    375.38    分子量：     C18H14N3NaO3S    英文名稱：    Ya Dinghuang    CAS號(hào)：    587-98-4    
 聚二甲基硅烷擔(dān)載的鈀/氧化鋁混合催化    分子式：        分子量：        英文名稱：    Mixed catalysis of palladium / alumina supported by poly two methyl silane    CAS號(hào)：    P2280    
 五味子素    分子式：    432.51    分子量：     C24H32O7    英文名稱：    Itsumi Kosu    CAS號(hào)：    7432-28-2    
 201紅色擔(dān)體    分子式：        分子量：        英文名稱：    201 red bear body    CAS號(hào)：        
 茜素絡(luò)合指示劑     分子式：    385.32    分子量：     C19H15NO8    英文名稱：    Alizarin complexone    CAS號(hào)：    3952-78-1一步式 PAGE 染液    61204-10    10 次
25Inh.U    α2巨球蛋白    
5g    氯    
250g    蛋白胨    
120 次     抗酒石酸酸性磷酸酶檢測(cè)試劑盒    
10mL    鎳柱介質(zhì)    
胰酶消化液 ( 含 EDTA)    90306A-100    100mL
柱式葡萄球 RNAout    130844-50    50 次
5mL    腦膜細(xì)胞生長(zhǎng)因子    
5g    8- 羥基喹啉硫    
12x50nm    Cyanine 5-NHS Ester    
50μL    生物素標(biāo)記 dUTP 溶液    
Di-2-ANEPEQ     22-0190-5    5mg
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝已滅帶芯 )    17-023-100    100 支
10g    葡聚糖 T-10    
20L    半干法電轉(zhuǎn)液 ( 干粉 )    
5mg    SP600125(JNK 抑制劑 )    
1μg    PCR LIC 克隆套裝    
Superoxide dismutase( 抗氧化酶 )    23-0760-2    2mg
柱式細(xì) DNAout( 含溶酶 )    60802B-50    50 次
100mL    RNase-free 氯化鋰溶液 ,10M